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Biologie Moléculaire - Guillemet de la Science
En quelque sorte qui apparie l'hasard, si pas la
conséquence, du bain d'Archimède et de la pomme de newton, [ 3.6
millions d'an de vieux ] les empreintes de pas fossiles n'étaient
pendant par la suite notées en septembre 1976 par la colline d'Andrew
de paléontologiste, qui est tombée tout en évitant une boule de
fumier d'éléphant lancée à lui par l'écologiste David
occidental. Lecteur de ~John, Liens Manquants : La chasse
pour le premier homme
Bulletin Moléculaire de Biologie !
Poteaux Récents de Forum
Fragments d'ADN de Purification d'Agarose
Station Moléculaire de Copyright 2007
Purification de fragment d'ADN de protocole
d'agarose
- Exécutez l'ADN sur le gel d'agarose de "basse
fonte".
- Pour des fragments d'ADN 600bp à 5kb use1% ; Pour
300- 700bp l'agarose de l'utilisation 2%. Si vous devez
exécuter de plus petits fragments utilisent 2% "Nusieve" + 1% "bas
fondent".
- Après que les bandes aient séparé, visualisez la bande
sur un cadre UV (réduisez au minimum l'exposition de l'ADN à UV)
- Découpez la bande (ne rayez pas le filtre UV sur
le cadre léger !).
- Ajoutez l'UL 100 de la mémoire tampon de T.E. (10mM
Tris-HCl pH EDTA de 7.6, de 1mM) à la bande, l'écrasement, la
chaleur à 65oC pour approximativement. 5 minutes, ajoutent
200l du phénol, le vortex, la chaleur 65°C pendant 3 mn, vortex.
- Microfuge 5 minutes, retirent supernant
- Ajoutez 100 l de T.E. au phénol, vortex, la
chaleur 65°C 3 mn de vortex
- Microfuge, supernants de regroupement.
- Extrait de chloroforme (approximativement 400 UL),
microfuge 3 minutes.
- Précipité EtOH, ajoutant 1/10 vol. 3M Na0Ac, 2.5 vol..
EtOH.
- -20°C 1-2+hrs ; la rotation 30 mn, sèchent vers le
bas, apportent vers le haut vol. approprié 0.1X T.E.
Extrémités pour la purification de gel d'agarose d'ADN
- Placez le transport-bloc d'éclairage à la
longue longueur d'onde UV (ou au de basse puissance). C'est une
grande voie de réduire au minimum la quantité de période et
d'énergie d'exposition UV d'ADN. Ceci réduira au minimum la
mutagénèse UV de l'ADN.
- Équilibre hors fonction autant d'agarose de la bande
comme possible sans éliminer l'ADN. Ceci aide dans la
contamination réduisante au minimum d'agarose qui mettra en valeur la
purification d'ADN.
- Si vous obtenez les kits commerciaux d'utilisation de
problèmes tels que spin-columns.There sont quelques excellents kits
pour extraire l'ADN si vous pouvez vous permettre les. Ceux-ci
incluent des kits de Qiagen, de sigma, et d'autres compagnies.
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