Fragments d'ADN de purification d'agarose

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Purification de fragment d'ADN de protocole d'agarose

1. Exécutez l'ADN sur le gel d'agarose de « basse fonte ».
2. Pour des fragments d'ADN 600bp à 5kb use1% ; Pour 300 - 700bp agarose de l'utilisation 2%. Si vous devez exécuter de plus petits fragments utilisent 2% « Nusieve » + 1% « bas fondent ».
3. Après que les bandes aient séparé, visualisez la bande sur un cadre UV (réduisez au minimum l'exposition de l'ADN à UV)
4. Découpez la bande (ne rayez pas le filtre UV sur le cadre léger !).
5. Ajoutez l'UL 100 de la mémoire tampon de T.E. (Tris-HCL pH de 10mM EDTA de 7.6, de 1mM) à la bande, l'écrasement, la chaleur à 65oC pour la minute approximativement 5, ajoutez 200l du phénol, le vortex, la chaleur 65°C pendant 3 mn, vortex.
6. Microfuge 5 minutes, retirent supernant
7. Ajoutez 100 l de T.E. au phénol, vortex, la chaleur 65°C 3 mn de vortex
8. Microfuge, supernants de regroupement.
9. Extrait de chloroforme (approximativement 400 UL), microfuge 3 mn.
10. Précipité d'EtOH, ajoutant 1/10 vol. 3M Na0Ac, 2.5 vol. EtOH.
11. -20°C 1-2+hrs ; la rotation 30 mn, sèchent vers le bas, apportent vers le haut le T.e. approprié de vol. 0.1X.

Extrémités pour la purification de gel d'agarose d'ADN

• Placez le transport-bloc d'éclairage à la longue longueur d'onde UV (ou au de basse puissance). C'est une grande voie de réduire au minimum le nombre de heures et l'énergie de l'exposition UV d'ADN. Ceci réduira au minimum la mutagénèse UV de l'ADN.
• Équilibre hors fonction autant d'agarose de la bande comme possible sans éliminer l'ADN. Ceci aide dans la contamination de minimisation d'agarose qui améliorera la purification d'ADN.
• Si vous obtenez les problèmes utilisent les kits commerciaux tels que des tourner-colonnes. Il y a quelques excellents kits pour l'extraction de l'ADN si vous pouvez se permettre les. Ceux-ci incluent des kits de Qiagen, de sigma, et d'autres compagnies.

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