bibliothèque de cDNA

Renseignez-vous sur des bibliothèques de cDNA.

bibliothèques de cDNA

les bibliothèques de cDNA ou les bibliothèques complemantary d'ADN sont une collection de fragments copiés de cDNA. les bibliothèques de cDNA sont les outils puissants et utiles car elles peuvent contenir toute l'information de codage (le code génétique qui produit des protéines) d'une population donnée de cellules.

génération de bibliothèque de cDNA

diagramme de bibliothèques de cDNA de la façon produire de elles

image de synthèse de cDNA

L'ARN doit être isolé d'abord dans une population de cellules. Plusieurs méthodes sont utilisées généralement afin de purifier l'ARN, ceux-ci incluent des méthodes de colonne basées par kit de polyA et d'autres méthodes chimiques telles que l'extraction de trizol. Un poly (A) la queue (se composant d'un long ordre de répétition des nucléotides d'adénine) est utilisée en cellules eucaryotiques comme site d'amorce pour la transcription renversée. le cDNA est créé de l'ADN messagère mûre utilisant l'enzyme renversée de transcriptase qui produit de l'ADN complémentaire de l'ARN. Ceci permet également l'amoricage spécifique des mRNAs et non tout autre RNAs pendant que les mRNAs contiennent une queue polyA la ' extrémité à leurs 3. Une fois que l'ADN messagère est isolée, oligo-décollement ou amorces aléatoires peut être utilisé avec le transcriptase renversé pour créer des descripteurs de cDNA. Des ribonucléases de restriction et la ligase d'ADN sont alors employées pour copier les ordres de cDNA dans les plasmides bactériens.

Après que le cDNA soit synthétisé, il est copié dans des vecteurs ou des plasmides d'expression. Ces plasmides chaque un cDNA contenant sont transformés en cellules compétentes bactériennes (faites compétent par des une série de le produit chimique ou d'autres méthodes afin de leur permettre de prendre le plasmide avec le cDNA). Ces plasmides sont alors amplifiés dans les bactéries grandissantes. Les clones de bactéries sont alors choisis de sorte que seulement les bactéries contenant le plasmide survivent. Ceci est généralement fait par la sélection antibiotique de résistance.

Une fois que les bactéries sont choisies, on crée des stocks des bactéries qui peuvent plus tard être développées et ordonnancées pour compiler une bibliothèque de cDNA.