Protocole bactérien d'isolement d'ADN de Genomic

Isolement d'ADN de Genomic dans le protocole de Bateria

Méthode de préparation pour l'isolement de l'ADN geneomic des bactéries utilisant la purification de triton

Élevez plusieurs colonies - grandes cultures de scale-15ml.
Moissonnez les cellules dans un tube simple d'eppendorf ou un tube jetable de 15 ml selon le volume.
Resuspendez le granule avec la mémoire tampon de 300ul STET (900ul).
Après avoir resuspendu ajoutez le mélange de la RNase 30ul/lysozyme (100ul).
Bouillez le granule pour 1 minute 15 secondes (une minute 45 secondes).
Tournez dans le microfuge pendant 15 minutes.
Prenez l'extrait de surnageant et de phénol avec du phénol 150ul (500ul) saturé par STET-.
Tournez et prenez le surnageant. Ajoutez le chlorure de lithium de 1/10 volume 4M (stérilisé à l'autoclave). Laissez se reposer sur la glace pendant 5-10 minutes.
Tournez et prenez le surnageant. Ajoutez l'isopropanol égal de volume. Droite pendant 5 minutes.
Rotation. Aucun granule ne sera visible. Ne paniquent pas, l'ADN est coincée pour dégrossir toute la voie vers le haut de tube.
Important : Lavage avec de l'éthanol de 80% (95% fera précipiter le résiduel Triton)
Resuspendez le granule dans 50-200ul.
Mémoire Tris-HCL pH8.0 de la RNase du lysozyme 1mg/ml du mélange 10mg/ml de RNase de lysozyme (catégorie bon marché d'utilisation (BMB) plutôt que RNase A, qui est trop chère) 50mM à -20oC dans de petites parties aliquotes. Ne recongelez pas suite au dégel.
L'EDTA pH 8.0 de Tris-HCL du sucrose 5% Triton X-100 50mM de STET 8% (pH8.0) 50mM stérilisent par filtration. Mémoire à 4oC