Bienvenue à la station moléculaire !

Vous devez vous enregistrer avant que vous puissiez signaler sur nos forum ou utiliser nos dispositifs avançés. Registre Maintenant ! Son libre et rapide !

Déjà enregistré ? Procédure de connexion maintenant ci-dessous.

Nom d'Utilisateur :

Mot de passe :

Rappelez-vous Moi ?

Déjà enregistré et a oublié votre mot de passe ? Clic ci-dessous pour le récupérer.

Récupérez Le Mot de passe Perdu

Joignez maintenant - il est rapide et libre !

La station moléculaire est le plus grand réseau des chercheurs, des scientifiques et des amoureux de la science n'importe où !

Poteaux Récents de Forum

Site De Signet De Signet

Contamination de Mycoplasma & Culture de Cellules

Nous incluons ici pour des laboratoires de culture de cellules, l'information sur des contaminations de mycoplasma et les dernières discussions de forum de mycoplasma pour toutes vos questions et discussions de contamination.

Fond de Mycoplasma

Mycoplasmas sont un genre des bactéries qui manquent d'un mur de cellules. En raison d'un manque d'un mur de cellules, elles sont résistantes à beaucoup d'antibiotiques comprenant la pénicilline ou à d'autres antibiotiques de bêta-lactame qui visent la synthèse de mur de cellules.

Le mycoplasma sont parasite ou saprophytique. Plusieurs le mycoplasma maladie-causent chez l'homme, y compris des pneumoniae de M., qui est une cause importante de la pneumonie atypique et d'autres désordres respiratoires, et le genitalium de M., qui est censé être impliqué dans les maladies inflammatoires pelviennes. Elles peuvent causer ou contribuer à quelques cancers.

Genre Mycoplasma

Le genre mycoplasma est l'un de plusieurs genres dans la classe Mollicutes. Mollicutes sont des bactéries qui ont de petits génomes, manquent d'un mur de cellules et ont un bas Chromatographie-contenu (18-40 %).

Il y a plus de 100 espèces identifiées du genre mycoplasma. Leur taille de génome s'étend de 0.58 1.38 megabase-paire. Mollicutes sont des parasites ou des commensals des humains, des animaux (insectes y compris), et des usines ; le genre mycoplasma est par la définition limitée aux hôtes vertébrés. Le cholestérol est exigé pour la croissance des espèces du genre mycoplasma aussi bien que certains autres genres des mollicutes. Leur température optima de croissance est souvent la température de leur centre serveur si warmbodied (par exemple 37 degrés de Celsius chez l'homme) ou la température ambiante si le centre serveur ne peut pas régler sa propre température interne. L'analyse des ordres ribosomal de l'ARN 16S comme le contenu de gène suggèrent fortement que les mollicutes, y compris les mycoplasmas, soient étroitement liés au lactobacille ou au branchement de clostridium de l'arbre phylogénétique (stricto de sensu de Firmicutes).

Lignes et Mycoplasmas de cellules

Dans des cultures de cellules, les mycoplasmas peuvent induire les changements cellulaires, y compris des aborations de chromosome, les changements du métabolisme et la croissance de cellules. Les infections graves de mycoplasma peuvent détruire une ligne de cellules ou rendre les lignes chères ou précieuses de cellules inutiles.

Contamination de culture de cellules avec le mycoplasma

Mycoplasmas sont souvent trouvés dans des laboratoires de recherches comme des contaminants dans la culture de cellules. La contamination mycoplasmique de culture de cellules se produit en raison de la contamination des individus ou des ingrédients souillés de milieu de culture de cellules.

Méthodes de Détection de Mycoplasma

Les cellules de mycoplasma sont habituellement plus petites que 1 µm et donc tout à fait difficiles à détecter avec des méthodes conventionnelles de microscopie. Les techniques de détection incluent :

• PCR
• PCR En temps réel
• Électrodéposition sur l'agar sensible
• Taches d'ADN comprenant DAPI ou ou tache de Hoescht

Protocole de Détection de Contamination de Mycoplasma de Tache de Hoechst

Un Hoechst (sigma, catalogue # :H6024) souillant la méthode pour le mycoplasma :

1. Pour les cellules adhérentes, placez un verre stérile de couverture dans la boîte de Pétri. Ajoutez 2 ou 3 gouttes de suspension de cellules au milieu des coverglass (selon la cadence de croissance de vos cellules).
2. Ajoutez alors soigneusement 2 ou 3 ml de support sans déranger les cellules. Accroissez les cellules jusqu'à ce qu'elles soient 50 -70% confluents.

Cellules de Réparation :

1. Préparez le fixatif de cellules qui est un méthanol du fo 3:1 de mélange : acide acétique glaciaire (M:AA). Vous assurez vous préparer ceci frais avant l'emploi.
2. Jetez le support des cellules croissantes. Ajoutez 2 ml du méthanol : solution glaciaire de l'acide acétique M:AA goutte-à-goutte sur le côté du plat (pas directement sur les cellules). Tourbillonnent le plat et jettent la solution.
3. Ajoutez 2 ml de M:AA, tourbillonnez et partez en fonction pendant 2 ou 3 minutes à la température ambiante.
4. Écart M : Solution et rinçage de aa avec de l'eau
5. Laissez à la concentration courante sèche de tache de Hoecht d'air (vous pouvez garder le plat jusqu'à ce que vous soyez prêt à souiller) (chat # 33258 du sigma) = 0.1 mg/ml dans l'eau que vous pouvez filtrer stérilisez à ce stade en utilisant des 0.2uM le récipient d'enveloppe de filtre dans la mémoire de papier d'aluminium à la solution fonctionnante de 4 oC préparent frais chaque fois selon les besoins font la dilution de 1:1000 (0.1 µg/ml) de la ressource dans l'eau

Souillure des Cellules :

1. Ajoutez assez de tache de Hoechst pour couvrir la glissade entière de couverture (utilisation 1-2ml pour une petite boîte de Pétri).
2. Laissez la tache en fonction pendant 45 minutes - 1 heure (dans l'obscurité).
3. Rincez bien avec de l'eau.
4. Montez sur une glissière de microscope (mélange mountant : 22 millimètres d'acide citrique ; 55.6 millimètres de phosphate disodique ; glycérol de 50%, mélange de pH 5.5) à l'endroit une baisse ou deux sur la glissade de couverture (cellules vers le haut) et la glissade de couverture d'endroit (cellules vers le bas) sur la glissière.
5. Visualisez sous le microscope de fluorescence

Note : enregistrez la tache de Hoechst à 4oC au moins, ou la partie aliquote dans le congélateur pour l'entreposage à long terme.