Écoulement Cytometry

L'écoulement cytometry (également appelé FCM) est une méthode de biologie moléculaire qui est utilisée généralement pour compter, des cellules rapidement examine, analyse et de tri ou même des particules microscopiques suspendues en fluide. Les cytometers d'écoulement permettent une analyse multiparametric simultanée des caractéristiques physiques et/ou chimiques des cellules ou des particules coulant après un appareillage optique et/ou électronique de détection, dans un flot liquide utilisant un faisceau de lumière laser.

La limite cytometry dérive des mots grecs pour la mesure (metry), et de la cellule (cyto) donnant à « écoulement cytometry » la mesure des cellules pendant qu'ils coulent après un détecteur.

L'écoulement ou trier de cellules est encore une autre capacité fonctionnelle d'écoulement cytometry permettant la séparation des types de cellules par l'utilisation des forces électriques ou mécaniques de rassembler des populations des cellules avec un ou plusieurs caractéristique physique ou de produit chimique réglée par l'utilisateur.

L'écoulement cytometry est utilisé généralement dans l'analyse du cycle de cellules, détection et analyse d'apoptosis ou nécrose, trier de cellules, détection extérieure d'antigène de cellules pour l'immunologie, et analyse de cellules de tige.

Mesures de Cytometry d'écoulement

L'écoulement Cytomers peut être employé pour mesurer les paramètres suivants, selon la machine, fluorophore et autre :

• volume de cellules
• caractéristiques morphologiques des cellules
• antigènes extérieurs de cellules (batterie des repères (CD) de différentiation)
• détection des colorants de cellules (c.-à-d. chlorophylle ou phycoérythrine)
• apoptosis (quantification, mesure de dégradation d'ADN, potentiel mitochondrique de membrane, modifications de perméabilité, activité de caspase)
• analyses de viabilité de cellules
• évaluez l'ADN (par exemple dans l'analyse de cycle de cellules, la cinétique de cellules, la prolifération)
• évaluez l'ARN
• analyse et trier chromosomiques (pour la construction de bibliothèque d'ADN ou la peinture de chromosome)
• évaluez pour l'expression et la localisation de protéine
• produits transgéniques in vivo, en particulier la protéine fluorescente verte ou les protéines fluorescentes associées
• activité enzymatique
• et beaucoup d'autres paramètres

Comment travail de Cytometers d'écoulement ?

Un faisceau de lumière (habituellement lumière laser) d'une longueur d'onde simple est dirigé sur un flot hydrodynamiquement focalisé de fluide. Un certain nombre de détecteurs sont visés le point où le flot traverse le faisceau lumineux ; un en conformité avec le faisceau lumineux (diffusion vers l'avant ou FSC) et plusieurs perpendiculaire à elle (diffusion latérale (SSC) et un ou plusieurs détecteurs fluorescents). Chaque particule suspendue passant par le faisceau disperse la lumière d'une manière quelconque, et les produits chimiques fluorescents trouvés dans la particule ou attachés à la particule peuvent être excited dans émettre la lumière à une fréquence inférieure que la source lumineuse. Cette combinaison de lumière dispersée et fluorescente est prise par les détecteurs, et en analysant des fluctuations dans l'éclat à chaque détecteur (un pour chaque crête fluorescente d'émission) il est alors possible d'extrapoler de divers types d'informations sur la structure physique et chimique de chaque particule individuelle. Le FSC se corrèle avec le volume de cellules et SSC dépend de la complexité intérieure de la particule (c.-à-d. forme du noyau, de la quantité et du type des granules cytoplasmiques ou de la rugosité de membrane). Certains coulent des cytometers sur le marché ont éliminé le besoin de fluorescence et utilisent seulement l'éparpillement léger pour la mesure. Autre coulent des images de forme de cytometers de la fluorescence de chaque cellules, de la lumière dispersée, et de la lumière transmise.