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Écoulement Cytometry

À l'écoulement cytometry, vous trouverez l'information de fond et les articles sur la méthode cytometry d'écoulement, les protocoles détaillés, les outils bioinformatic d'analyse et un forum cytometry d'écoulement pour toutes vos questions et discussions de recherches de biologie de cellules.

Fond de Cytometry d'Écoulement

L'écoulement cytometry (également appelé FCM) est une méthode moléculaire de biologie qui est généralement employée pour compter, des cellules rapidement examine, analyse et de tri ou même des particules microscopiques suspendues en fluide. Les cytometers d'écoulement permettent une analyse multiparametric simultanée des caractéristiques physiques et/ou chimiques des cellules ou des particules coulant après un appareillage optique et/ou électronique de détection, dans un jet liquide en utilisant un faisceau de lumière de laser.

La limite cytometry dérive des mots grecs pour la mesure (metry), et de la cellule (cyto) donnant à "écoulement cytometry" la mesure des cellules pendant qu'ils coulent après un détecteur.

L'écoulement ou trier de cellules est encore une autre capacité fonctionnelle d'écoulement cytometry permettant la séparation des types de cellules par l'utilisation des forces électriques ou mécaniques de rassembler des populations des cellules avec une ou plusieurs caractéristique physique ou de produit chimique réglée par l'utilisateur.

Applications de Cytometry d'Écoulement

L'écoulement cytometry est généralement utilisé dans l'analyse du cycle de cellules, détection et analyse d'apoptosis ou nécrose, trier de cellules, détection extérieure d'antigène de cellules pour l'immunologie, et analyse de cellules de tige.

Mesures de Cytometry d'Écoulement

L'écoulement Cytomers peut être employé pour mesurer les paramètres suivants, selon la machine, le fluorophore et l'autre :

• volume de cellules
• caractéristiques morphologiques des cellules
• antigènes extérieurs de cellules (batterie des repères de différentiation (CD))
• détection des colorants de cellules (c.-à-d. chlorophylle ou phycoérythrine)
• apoptosis (quantification, mesure de dégradation d'ADN, potentiel mitochondrique de membrane, changements de perméabilité, activité de caspase)
• analyses de viabilité de cellules
• évaluez l'ADN (par exemple dans l'analyse de cycle de cellules, la cinétique de cellules, la prolifération)
• évaluez l'ARN
• analyse et trier chromosomiques (pour la construction de bibliothèque d'ADN ou la peinture de chromosome)
• évaluez pour l'expression et la localisation de protéine
• produits transgéniques in vivo, en particulier la protéine fluorescente verte ou les protéines fluorescentes associées
• activité enzymatique
• et beaucoup d'autres paramètres

Comment Travail de Cytometers d'Écoulement ?

Un faisceau de lumière (habituellement lumière de laser) d'une longueur d'onde simple est dirigé sur un jet hydrodynamiquement focalisé de fluide. Un certain nombre de détecteurs sont visés le point où le jet traverse le faisceau lumineux ; un en conformité avec le faisceau lumineux (diffusion vers l'avant ou FSC) et plusieurs perpendiculaire à elle (diffusion latérale (SSC) et un ou plusieurs détecteurs fluorescents). Chaque particule suspendue passant par le faisceau disperse la lumière d'une manière quelconque, et des produits chimiques fluorescents trouvés dans la particule ou attachés à la particule peuvent être excités dans émettre la lumière à une plus basse fréquence que la source lumineuse. Cette combinaison de lumière dispersée et fluorescente est prise par les détecteurs, et en analysant des fluctuations dans l'éclat à chaque détecteur (un pour chaque crête fluorescente d'émission) il est alors possible d'extrapoler de divers types d'informations sur la structure physique et chimique de chaque particule individuelle. FSC se corrèle avec le volume de cellules et SSC dépend de la complexité intérieure de la particule (c.-à-d. forme du noyau, de la quantité et du type des granules cytoplasmiques ou de la rugosité de membrane). Certains coulent des cytometers sur le marché ont éliminé le besoin de fluorescence et utilisent seulement l'éparpillement léger pour la mesure. Autre coulent des images de forme de cytometers de la fluorescence de chaque cellules, de la lumière dispersée, et de la lumière transmise.