Protocole de méthode de lysis de cellules

Le lysis de cellules ou l'interruption cellulaire est une méthode de biologie de cellules pour la version des molécules biologiques comprenant des organelles, des protéines, l'ADN, l'ARN et des lipides de l'intérieur d'une cellule.

Pour la plupart des cellules, l'osmose doux est assez habituellement au lyze les cellules. Ceci est fait en abaissant la concentration ionique de la solution environnante, entraînant les cellules gonfler et l'éclat libérant leur contenu.

Les surfactans doux sont employés souvent en plus des méthodes mécaniques de lysis.

Les méthodes mécaniques ou physiques de lysis incluent :

• agitation mécanique
• pression
• sonication
• panne d'azote ou méthode de lysis d'éclat d'azote
• ultrason avec de petites sondes

Ces étapes sont conduites pour s'assurer que complet dissociez de la cellule et de ses composants cellulaires comprenant la panne des membranes organellar et nucléaires.

En raison des coûts élevés d'élever des cellules, habituellement seulement un peu de matériel cellulaire est disponible. Il est ainsi nécessaire d'être efficace en lysant des cellules de s'assurer que le maximum du matériel utilisable est obtenu. Souvent, plusieurs méthodes sont employées en association pour assurer le lysis presque complet.

Le lysis de cellules est essentiel pour l'extraction de l'ADN, de l'ARN et des protéines des cellules. Par conséquent, il est nécessaire dans la plupart des techniques de biologie de cellules et même techniques de biologie moléculaire.

Le lysis de cellules est limité dans son utilisation pendant qu'il exige de la membrane de cellules d'être percé et du contenu de cellules à libérer. Ces cellules lysées meurent et ne peuvent pas être cultivées ou développées de nouveau.

Il y a beaucoup de facteurs pour considérer quelle méthode de lysis de cellules à utiliser ou comment la conduire.

Volume de cellules

La quantité de cellules à lyser est un paramètre important dans le lysis de cellules. Si vous avez seulement très

Si seulement quelques microlitres d'échantillon sont disponibles, le soin doit être pris pour réduire au maximum la perte et pour éviter la contamination transversale.

L'interruption des cellules, quand des centaines ou même les milliers de litres de matériel sont traités dans un environnement de production, présente un défi différent. Le débit, l'efficacité, et la reproductibilité sont des facteurs clé.

Nombre d'échantillons de cellules à Lyze

Souvent il y a beaucoup d'échantillons de cellules au lyze. Il y a beaucoup d'issues pour considérer en faire ceci comprenant la contamination en travers des échantillons, la vitesse du traitement, et le nettoyage de matériel après chaque échantillon est lysée.

Difficulté des cellules à Lyze

Il est tout à fait difficile lyser quelques cellules. À mesure que la difficulté de lysis augmente, une plus grande force de lysis ou une concentration ionique plus élevée des mémoires tampons est exigée pour perturber efficacement les cellules.

Pour un lysis plus difficile des échantillons de cellules tels que des échantillons de levure, il y a une augmentation raide en capacité de traitement, temps et coût exigés.

Pour les échantillons les plus difficiles au lyze, tel que les spores bactériennes, ceux-ci exigent les forces mécaniques combinées avec des efforts chimiques ou enzymatiques. Le problème est même avec multiple et des méthodes plus dures, habituellement une réalise des efficacités limitées d'interruption.

Efficacité de lysis de cellules

Selon quelle partie de la cellule, l'organelle ou vous fractionnent le besoin d'isoler, au-dessus-lysis peut affecter votre produit désiré.

Si le fractionnement sous-cellulaire est utilisé, il est plus important d'avoir un lysis sensible pour réaliser les composants sous-cellulaires intacts d'une organelle. Évidemment, vous réaliserez une efficacité inférieure de lysis et aurez besoin ainsi de plus de cellules. Pour mesurer ces processesses de lysis de cellules, l'heure de perturber les cellules et la reproductibilité de la méthode deviennent des facteurs plus importants.

Lysis de cellules contre la molécule à isoler

Il est très important d'approvisionner la méthode de lysis à la protéine que vous avez besoin d'isolement. Si c'est une protéine nucléaire, inquiétez-vous est prié de lyser la cellule d'abord et d'isoler ensuite la membrane nucléaire. Après que la membrane nucléaire soit isolée, puis on peut lyser la membrane nucléaire et libérer la molécule d'intérêt. Cette méthodologie diminue la contamination des molécules qui sont d'autres compartiments/organelles cellulaires.

En outre, selon la molécule le soin doit être pris à l'utilisation ou pas aux certaines solutions ou méthodes de lysis d'utilisation. Par exemple, si vous essayez d'isoler une phosphoprotéine qui est sensible aux phosphatases, ce n'est pas une bonne idée de lyser et exposer la phosphoprotéine aux milliers de protéases et d'enzymes de phosphatase. La protection de votre molécule contre des conditions dures ou enzymatiques est importante. La température (basse température de lysis), et l'utilisation des molécules inhibitrices (telles que des inhibiteurs de protéase et de phosphatase) est importante dans ces cas de lysis.