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Sous-cultivant des Cellules - Culture de Cellules

Culture de Cellules

Protocole de Culture secondaire de Cellules

SOUS-CULTURE DES CELLULES

 

Obtenez les medias 4C de DMEM ; Trypsin-20C ; BSA-20C ;

Mettez dans 36mL de DMEM dans le plastique conique de tube

Ajoutez 4mL des medias de BSA à 36mL DMEM ;

Obtenez la seringue et le filtre ;

Sucez vers le haut des medias avec la seringue.  Ajoutez le filtre. 

Éliminez les medias par le filtre sur la seringue.

Répétez deux fois pour obtenir tout le volume. 

Mettez dans le nouveau tube en plastique conique. 

Retirez les vieux medias en vidant dans le becher ; N'UTILISEZ PAS L'ASPIRATEUR (obtenez la contamination ! !)

Ajoutez le typsin 3mL à la culture.  Trypsine avec des cellules de traction outre du récipient de culture.

Mettez le récipient dans l'incubateur.  Attendez 2 minutes ; Sortez ;  regardez dans le microscope. 

Essayez d'obtenir moins de blocs.  Des cellules plus différentes.

Éliminez la majeure partie de trypsine en vidant dans le becher.

Mettez  de nouveau dans l'incubateur. Contrôlez fréquemment.

Giflez le récipient des côtés pour examiner le bas pour assurer moins de blocs ; regardez dans le microscope.

Quand voir les beaucoup de différentes cellules flotter le long ; Grand !

Ajoutez les medias à un plus grand récipient ; dilution 1:5/ de 1:3 (3-5 récipients plus grands).

Ajoutez 10mL à (récipient de T75)large, 5mL à (récipient de T25)small.

Sucez hors des la plupart (5mL des cellules de T25). Ajoutez à T75.

Laissez quelques cellules dans le petit récipient.  Ajoutez les medias au petit récipient.  Signez le microscope des cellules ;  Incubez dans l'incubateur 37C. 

 

Voir d'autres Cellule-protocoles à notre répertoire de biologie de cellules et de protocole de culture de cellules.