Électrophorèse de gel d'agarose

Ce site d'électrophorèse de gel d'agarose est votre portail pour toutes les choses liées à la technique d'électrophorèse de gel d'agarose et à son analyse. Nous te fournissons tous les information de fond, protocoles, étapes d'analyse, visualisation et information de dépannage pour les gels courants d'agarose pour que l'ADN, l'ARN ou la protéine aille bien à l'expert final en matière d'électrophorèse de gel d'agarose !

Table des matières d'électrophorèse de gel d'agarose

• Quelle est électrophorèse de gel d'agarose ?
• Fond
• Applications
• Matériaux
• Mémoires tampons
• Transfert
• Limites de résolution des gels d'agarose
  
• Préparation
• Protocole
• Visualisation
• Analyse de gel
• Vidéos d'électrophorèse de gel d'agarose
• D'autres protocoles d'électrophorèse de gel d'agarose
• Gels d'agarose de dépannage
• Sujets de discussion pour l'électrophorèse de gel d'agarose
• Obtenez l'aide sur votre problème de gel d'agarose

Quelle est électrophorèse de gel d'agarose ?

L'électrophorèse de gel d'agarose est une méthode employée dans la biochimie et la biologie moléculaire pour séparer l'ADN, ou des molécules d'ARN par des protéines de taille cependant peuvent également être séparées sur des gels d'agarose. La séparation des molécules est réalisée en déplaçant négativement - les molécules chargées d'acide nucléique par une matrice d'agarose dans un champ électrique (voir l'électrophorèse). Des molécules plus courtes se déplacent plus rapidement et executent plus loin que plus longtemps ceux.

Applications de l'électrophorèse de gel d'agarose

Transfert en gels d'agarose

Limites de résolution des gels d'agarose

Des gels d'agarose peuvent être employés pour la séparation des fragments d'ADN s'étendant de 50 paires de base à plusieurs megabases (millions de bases) par l'électrophorèse. Généralement cependant, l'électrophorèse de gel d'agarose est employée pour séparer l'ADN de l'ACP et du clonage dans l'intervalle de 100bp environ à 15kb. Les délais d'exécution sont environ 30 minutes - 1 heure de long.

Petit DNAs ou RNAs (plus petit que 100bp) mieux sont séparés par des gels de polyacrylamide, toutefois 2-3% gels d'agarose peuvent être adéquats pour séparer même les fragments 50bp des acides nucléiques beaucoup plus grands.

Récemment cependant, on lui a affiché que jusqu'à une différence de base de taille de paires pourrait être resolved sur un gel d'agarose de 3% avec extrêmement - le bas support de conductivité tel que 1 millimètre de borate de lithium (JR de Brody, Calhoun es, Gallmeier E, Creavalle expert en logiciel de TD, Kern (2004). Électrophorèse à haute résolution ultra-rapide d'agarose de l'ADN et de l'ARN utilisant de bas-molarity medias conducteurs. Biotechniques. 37:598 - 602.).

Tableau de pourcentage de gel d'agarose et d'intervalle efficace de séparation :

Comme vous pouvez voir que les bas gels d'agarose de pourcentage sont les meilleurs pour la séparation de grandes molécules d'ADN, tandis que haut les gels de pourcentage sont les meilleurs pour plus petit DNAs.

Purification d'ADN avec l'extraction de gel d'agarose

Comme mentionné avant, l'électrophorèse de gel d'agarose permet la séparation et ainsi la purification de l'ADN pour le clonage. Cependant, ceci exige habituellement la basse agarose de fonte de grande pureté si l'ADN doit être extraite à partir du gel.

Mémoires tampons d'électrophorèse de gel d'agarose

Selon la taille de l'ADN electrophoresed et l'application, différentes mémoires tampons peut être utilisée pour l'électrophorèse d'agarose. La mémoire tampon de TAE (ou l'EDTA d'acétate de Tris) est la mémoire tampon d'électrophorèse de gel d'agarose utilisée la plus commune. TAE a le plus bas pouvoir tampon des mémoires tampons, toutefois TAE offre la meilleure résolution pour une plus grande ADN. Cependant, TAE a besoin d'un à tension inférieure et plus de temps.

Cependant la mémoire tampon de TBE (Tris/Borate/EDTA) est employée souvent pour de plus petits fragments d'ADN (IE moins que 500bp).

Le borate de sodium ou la solution tampon de SB est une nouvelle mémoire tampon, toutefois elle est inefficace pour le plus grand kb que 5 de résolution de fragments. Cependant le SB a des avantages dans sa basse conductivité, permettant des tensions plus élevées (jusqu'à 35 V/cm). Ceci a pu accorder plus peu de durée de l'analyse pour l'électrophorèse courante.