Gen normalizador en PCR en tiempo real

[MarionR25]

Saludos, soy nueva en el foro y me da gusto encontrar uno en español.


Estoy haciendo PCR en tiempo real con SYBR green en un Rotor gene 6000, mi pregunta es si los valores del ct del Normalizador (estoy usando GAPDH) deben ser los mismos independientemente del tratamiento (estoy usando varias concentraciones de un fármaco) de la corrida (ya que estoy haciendo tres repeticiones independientes) y del gen. Como es es normalizador yo supondria que su valor no debería cambiar

En dos experimentos me salio aprox de 12 y en otro de 8, esta variación significa algún error?

Gracias, realmente estoy confundida!!!!

[luisillo]

El gen normalizador es una referencia para poder corroborar si efectivamente la expresión de tu gen problema se está aumentando o disminuyendo con los tratamientos. En otras palabras, se compara el valor ct del normalizador contra el valor ct del gen problema.

El valor ct del normalizador SI puede variar entre tratamiento y tratamiento, por eso es importante que se incluya, así puedes darte una idea si tu tratamiento es efectivo para estimular o disminuir la expresión de tu gen independiente de la proliferación o muerte celular, respectivamente.

En cuanto a los valores, no debe haber mucha variación entre repeticiones de un mismo tratamiento. Cabe señalar que si pasa, suele ser un error de manos.

Buena suerte.