Alguien me puede ayudar con la tecnica de PCR en colonia!!!!

[pp_martinezz@hotmail.com]

Hola, tengo un problema con la técnica de PCR en colonia, ya que al realizarla para verificar el inserto de DNA en el vector TOPO pcr2.1 no logro obtener la amplificación del inserto, utilizo los primer universales M13 reverso y directo que vienen en el kit de TOPO, sin embargo las mismas clonas realizando una miniprep y su respectiva digestion con EcoRI resultan positivas.
Asi que si alguien me puede ayudar a resolver el problema de el porque no me sale la PCR en colonia se los voy a agradecer..

[danfive]

Si el EcoRI digestion del miniprep trabaja, entonces si tienes ADN. Pero es posible que en la PCR tienes mucha or muy poca, puedes hacer diluciones de ADN.
O puede ser que tu PCR tiene problemas, concentraciones de primers o Mg++.
Trabaja tu control positivo the PCR?