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Problemillas con la PCR

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  #1  
Old 12-12-2007, 05:00 AM
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Unhappy Problemillas con la PCR



Hola, tengo un problema con la pcr y quisiera saber si el cambio de un nucleótido en la secuencia de un solo primer puede llevar a que ya no me amplifique.
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  #2  
Old 12-12-2007, 03:48 PM
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Si puede pasar que no amplifique. Lo mas rasonable es que si substitues un nucleotido G/C (fuerte) en ves de A/T (debil) puedes amplificar, pero si haces lo contrario y substitues un A/T en ves the un G/C es muy posible que falle el primer. Mucho depende de la sequencia en total, como si el primer tiene mucho sequencia G/C tendra fuerte hibridacion (y el error tendra menos efecto), pero si tiene mucha A/T tendra debil hibridacion (y el efecto sera peor, como meter A/T puede fallar la amplificacion, meter G/C puede amplificar pero no correctamente).
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  #3  
Old 12-12-2007, 04:51 PM
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Muchas gracias por tu aporte, ahora voy a pedir prestados unos primers para corroborar que sean estos los que me estan fallando.
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  #4  
Old 12-15-2007, 03:25 AM
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que tal, una de las cosas que puedes hacer es ver si la secuencia que quieres amplificar tiene alguna mutacion con la de tu primer, una, si el primer tiene una mutacion en los primeros nucleotidos puede que no se pegue adecuadamente, dos checa bien la Tm del primer, en ocasiones tienes que modificar un poco las temperaturas de alineamiento, ya que tienes un rango de +-5grados, la tercera, puedes mandar sintetizar un primer degenerado si hay cambios en los nucleotidos. y asi como menciono el anterior post, tienes que ver que tanta citosina y guanina tienen, si hay mas timina y adenida, etc... espero y lo resuelvas hasta luego...
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  #5  
Old 11-28-2009, 02:41 AM
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saludos a todos, soy nuevo en este foro, soy estudiante de microbiologia, he estado leyendo acerca de la tecnología de los microarrays, pero mayormente encuentro ejemplo aplicados a cáncer, es decir, cuando se usan dos tipos de muestras de tejidos, tanto sano como infectado, y las diferencias que estos presentan a nivel de la transcripción de genes, mi pregunta es como se aplicaría esta técnica para el diagnostico de los virus influenza (h5n1), ademas como daría ese diagnostico, pues como sabemos lo virus evolucionan constantemente, debido a las multiples recombinaciones que sufren, entonces de que servirian los microarrays, xq se aplicarian a las células infectadas con virus???, bueno tengo muchas interrgantes, peor por lo pronto espero que puedan ayudarme con estas, tal vez sean tontas mis dudas, espero que me comprendan, solo quiero aprender. gracias a todos, cuidense espero su respuesta...
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con , pcr , problemillas


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