Extraccion de RNA

[VP4Sec.]

Hola, me podrian ayudar, cuales son los fundamentos del material para la extraccion del RNA, la lisis la entiendo y algunas cosas sobre el tema, pero me gustaria saber un poco mas, que tienen que ver todos los materiales empleados, el cloroformo, porque se satura el fenol con tris, para que sirve eso, el trizol, como funciona, se los agradeceria mucho,

soy estudiante de primer semestre y me meti a un laboratorio donde trabajan con biologia molecular y quisiera aprender mas....

muchas gracias...

[danfive]

Hay varias metodologias the extraccion, como Trizol, o Qiagen RNA extraction kit, etc. A cual te refieres?

[VP4Sec.]

yo me refiero a el Trizol, y a la de fenol cloroformo, cuales son los fundamentos, me refiero que hace cada cosa, para despues tener tu RNA....

[danfive]

Extraccion con Trizol
Ingredientes de trizol:
----Guanidine thiocyanate---desnaturilizacion de proteinas, y ruptura de membrana plasmatica, y hasta separacion the arn de ribosomas
----Phenol saturado--separacion y estabilizacion de lipidos (fase organica), proteina y ADN (linea divisora) y ARN (fase acuosa)
Otros materiales empleados
Cloroformo---liquido organico volatil, que ayuda separar el fenol saturado a fases acuosa y organica con la adn y lipoproteinas en la linea divisoria
Isopropanol---alcohol muy miscible con agua que se le agrega al fase acuoso para deshidratacion de la arn, luega la arn forma precipitado con ayuda de centrifugacion
75% etanol---usado para lavar arn precipitado; sales tambien son separadas en fase acuosa y precipitadas con isopropanol. El lavado reduce las sales porque son solubles en la 25% agua, mientras el 75% etanol mantiene arn precipitado.
Agua pura o TE o PBS---para disolucion del arn precipitado

[VP4Sec.]

Y como actua el isotiocianato de guanidina, que interactua con que? y porque en ocasiones el alcohol (etanol) lo agregan frio....

[danfive]

Originally Posted by VP4Sec.

Y como actua el isotiocianato de guanidina, que interactua con que? y porque en ocasiones el alcohol (etanol) lo agregan frio....

el isotiocianato de guanidina----las proteinas tienen su estructura 3-D y este quimico (como muchos otros alternativos, detergentes) destruye la estructura, pero deja los enlaces peptidicos, sin los doblados de la estructura las proteinas, y proteina-lipido se desagregan

el alcohol isopropanol o etanol es agregado frio, aveces, porque la baja temperatura estabiliza el adn/arn y inicia precipitacion.