problemas con la PCR

[vane]

tengo que genotipificar unos ratoncitos y la pcr no me sale, alquien me puede ayudar, ya la hice una vez y salio todo bien, pero ahora no sale nada.

[luisillo]

Cambiaste de reactivos entre la pcr que te salió y la que no. Los primers pueden degradarse por DNasas o por irradiación con UV y la enzima pierde su actividad si no la almacenas a -20ºC. Yo te recomendaría cambiar cualquier reactivo del que sospeches o de plano usarlos todos nuevos.

También puede ser que tengas un inhibidor en tus muestras debido a algún error en la extracción, o que se te hayan degradado. ¿Cuantificaste tus muestras antes del pcr? ¿utilizas algún control positivo en tu pcr?

Como ves son muchas las cosas que pudieron influir. Trata de especificar mas tu problema para que se te pueda dar una respuesta más acertada.

[vane]

muchas gracias, lo que yo hago es cortar la cola de los ratones y disolverla en buffers y de esta solucion saco 5 mucrolitors para hacer el pcr es un protocolo muy sencillo y la primera vez que lo hice me resulto, he cambiado todos los reactivos excepto los primers, siempre hago un control positivo, pero ahora tampoco me da. la enzima siempre la manejo a -20ºC. Gracias