Bioinformatics, Protocols, DNA RNA Protein Proteomics Bioinformatiikka, pöytäkirjat, DNA-RNA-Proteiini proteomiikka

Biology Home Protocols Bioinformatic Tools Biology Forums Molecular Biology Encyclopaedia Molecular Biology Images Bookmark Us! Biologia Etusivu pöytäkirjojen bioinformatiikan välineitä Biologia Forums Molecular Biology Encyclopaedia Molecular Biology Images Bookmark Us!

home > protein > troubleshooting-western-blots > index.php etusivu> proteiinin> Vianmääritys-Länsi-blots> index.php

Molecular Biology Home Science News Science Videos DNA RNA Protein Proteomics Research BETA! Bioinformatics Lab Equipment Molecular Biology Techniques Molecular Biology Products and Services Related Biology Links Molecular Biology Etusivu Tiede Uutiset Science Videos DNA-RNA-Proteiini proteomiikka Tutkimus BETA! Bioinformatics Lab-laitteet Molecular Biology Techniques Molecular Biology liittyviä tuotteita ja palveluja Biology Links

Molecular Biology Blog Molecular Biology Blog

Send this page to a friend Send this page to a friend

Intracellular Stations Solunsisäiset asemat

Antibody Botany Common Buffers Buffers Alphabetic Bookstore Cell Biology and Culture Gel Electrophoresis Histology Microarrays Immunology Mass Spectrometry Microbiology Molecular Imaging Peptide Proteomics Protein Microarray Chips PCR Real-Time PCR RNAi and SiRNA Stem Cell Biology Transfection Western Blot Vasta Botany yhteisen Puskurit Puskurit Alphabetic Bookstore solubiologian ja kulttuuri geelielektroforeesilla histologian microarray Immunology massaspekrometria mikrobiologian laitos Molecular Imaging peptidi proteomiikka Proteiini Microarray Chips PCR-Real-Time PCR RNAi ja SiRNA Stem Cell Biology Transfection Western Blot

Western Blot Western Blot

Western Blot Protocols Western Blot pöytäkirjat

Western Blot Forum Western Blot Forum

Western Blot Products Western Blot Tuotteet

Western Blot Books Western Blot Kirjat

Western Blot Troubleshooting Western Blot Vianetsintä

Western Blot Books Western Blot Kirjat

Troubleshooting Western Blots Vianetsintä Länsi Blots

The Molecular Station Guide to Western Blotting Problems and Solutions: Common Western Blot Problems and Solutions for them! Molekyylilääketieteen Station Guide to Western blotting ongelmia ja ratkaisuja: Yhteinen Western Blot ongelmia ja ratkaisuja niihin!

Please Contact Us with your ideas if you can add to this guide. Ota meihin yhteyttä ideasi, jos voit lisätä tämän oppaan.

What is your western blot problem? - Organized Alphabetically Mikä on teidän Western blot ongelma? - Organized aakkosjärjestykseen

Fuzzy Bands Sumea Bands

Low Signal Low Signal

Membrane is Glowing in the Dark Room Membrane on Glowing in the Dark Room

High Background High Taustaa

Spots on Film Spots-Film

Too many Bands in Western Blot Liian monta Bands in Western Blot

Weak Signal Weak Signal

Troubleshooting Western Blots Problem: Vianetsintä Länsi Blots Ongelma:

Spots on Film (missing bands) : Spots-Film (puuttuvat bändit):

- Poor Transfer due to air bubbles during transfer to membrane -- Poor Siirto johtuu ilmakuplia aikana siirtää membrane

- dirty film when adding to the developer -- Dirty elokuva Kun lisäät kehittäjän

- developer rolls are dirty -- Developer rullina ovat likaisia

Solution to spots on film: Ratkaisu pisteitä Filmi:

- use a pasteur pipette as a roller. -- Käytä pasteur pipetillä kuin telalla. roll the membrane and gel before transfer to remove bubbles. roll-on kalvojen ja geeliä ennen siirtoa poistaa kuplat. keep membrane and materials wet. pitää kalvojen ja materiaalien märkä.

- keep film clean before adding to the developer -- Pitämään elokuvan puhdasta ennen lisäämällä kehittäjän

Troubleshooting Western Blots Problem: Vianetsintä Länsi Blots Ongelma:

Too Many Bands in Western Blot : Liian monet Bands in Western Blot:

- usually due to many non-specific bands -- Yleensä johtuu monista ei-yhtyeistä

- poor primary antibody quality or old antibody -- Poor primary vasta-aineen laatu tai vanhoja vasta-aine

- not enough blocking -- Ei riitä esto

- proteolytic cleavage of antigen - all additional bands are lower MW than your protein, ( ie your protein is being detected but was degraded) -- Proteolyyttiset cleavage antigeenin - kaikki muut bändit ovat alhaisemmat MW kuin proteiini (eli teidän proteiinin on havaittu, mutta oli huonontuneen)

Solutions to too many bands on western blot: Ratkaisut liian monet bändit Länsi-blot:

- purchase another antibody or replace with a fresh antibody stock -- Ostaa toisen vasta-aineen tai korvata tuore vasta-aine varastossa

- block with 5% dry non-fat milk or BSA prior to adding primary. -- Lohko 5% kuivia rasvattomia maito tai BSA ennen perusterveydenhuoltoon. If you are already blocking, consider blocking during primary and secondary antibody incubations and also increasing blocking milk or BSA concentration. Jos olet jo esto, harkitse esto aikana perusasteen ja toisen vasta-aineen incubations ja lisäisi myös estää maitoa tai BSA keskittymä.

- keep everything on ice, use fresh samples, store in - 80C, and use protease inhibitors such as PMSF -- Pitämään kaiken jäällä, käytä tuoreet näytteet, säilytetään - 80C, ja käyttö-proteaasin estäjät, kuten PMSF

Troubleshooting Western Blots Problem: Vianetsintä Länsi Blots Ongelma:

High background; low signal to noise ratio on Western Blot High tausta; alhainen signaali-kohinasuhde Länsi-Blot

- black or every dark film; film was exposed too long -- Musta tai joka pimeässä elokuva, elokuva oli alttiina liian pitkä

- blocking was insufficient ; non-specific binding of primary antibody and secondary antibodies were not washed completely -- Esto oli riittämätön, ei-sitova alkutuotannon vasta-aine ja toisen vasta-aineita ei ole pesty täysin

- washing was insufficient -- Pesu oli riittämätön

- film glows in dark! -- Elokuva hehkuu tumma! - too high secondary or primary dilutions -- Liian korkea toisen tai ensisijainen laimennoksia

Solutions to Dark Film: Ratkaisuja Dark Filmi:

- expose for less time, decrease exposure time -- Altistaa vähemmän aikaa, vähemmän altistumisen aika

- increase blocking duration of non-fat dry milk 5% incubation or increase the concentration. -- Lisätä esto kesto Rasvaton kuiva-maito 5% itämisaika tai keskittämisen lisäämiseksi.

- also you can try blocking with whole serum of the host animal with (or before) the secondary antibody -- Lisäksi voit yrittää estää kanssa koko seerumissa vastaanottavan eläimen (tai ennen) jälkimarkkinoilla vasta-aine

- increase washing times and volumes to help remove any non-specific signal due to weak antibody binding. -- Lisätä pesu kertaa ja volyymien auttaa poistamaan kaikki ei-signaali johtuu heikosta vasta-aine sitova.

- using a stronger detergent to wash - Instead of TBST (Tween-20), use stronger detergents such as NP-40 or SDS which may provide a more stringent wash and reduce background (do this only if you band is strong! - washing also removes some your band of interest!) -- Käyttämällä vahvempaa pesuainetta pestä - Sen sijaan, TBST (Tween-20), käyttö vahvempia pesuaineita, kuten NP-40 tai SDS, jotka voivat antaa tiukempia pestä ja vähentää taustan (tehdä tämän vain, jos bändi on vahva! - Pesu myös poistaa joitakin bändisi kiinnostaa!)

- very high secondary antibody (or even primary) concentration - perform optimization experiments to determine proper antibody dilutions. -- Erittäin korkea johdetun vasta-aine (tai edes ensisijainen) pitoisuus - suorittaa optimoinnin kokeiluja määrittää asianmukainen vasta-aineen laimennoksia. dilute the antibodies further. laimennetaan vasta pidemmälle.

Troubleshooting Western Blots Problem: Vianetsintä Länsi Blots Ongelma:

Low Signal or Weak Signal Matala signaali tai Weak Signal

- due to not enough protein loaded on the gel -- Koska ei ole tarpeeksi proteiinia lastataan geelin

- primary antibody is old or not good -- Alkutuotantosektori on vasta-aine on vanha tai ei hyvä

- phospho-proteins usually need overnight primary antibody incubation -- Phospho-proteiinit yleensä tarvitse yhdessä yössä primary antibody itämisaika

- not enough secondary antibody -- Ei riitä johdetun vasta-aine

- over-blocking -- Yli-esto

- developing reagents are bad / you made a mistake when preparing them -- Kehittämällä reagenssit ovat huonoja / olet tehnyt virheen, kun valmistellaan

Solutions to Low Signal or Weak Signal : Ratkaisuja Matala signaali tai Heikko Signaali:

- load more protein sample onto gel -- Kuorman enemmän proteiinia näytteen päälle geeli

- try fresh primary antibody -- Yritän tuoreen primary antibody

- incubate primary antibody overnite for phosphoproteins at 4 degrees C (cold room shaker) -- Inkuboidaan primary antibody overnite for phosphoproteins on 4 ° C (kylmätilaa ravistelija)

- increase concentration of protein (lyse samples in less lysis buffer) -- Lisätä keskittymistä proteiini (lyse näytteitä vähemmän lysis-puskuri)

- decrease concentration of blocking agent -- Lasku keskittymä estää agentin

- check the developing reagents; prepare fresh ECL and re-ECL the membrane -- Tarkistaa kehitysmaiden reagenssit; valmistetaan ECL ja uudelleen-ECL, membrane

- increase the concentration or the length of primary antibody incubation period -- Keskittämisen lisäämiseksi tai pituus primary antibody itämisaika

- increase concentration or the length of secondary antibody incubation period -- Lisätä keskittymistä tai pituus johdetun vasta-aine itämisaika

Fuzzy Bands, Bands Smeared, Bands not Sharp Sumea bändit, Bands Smeared, Bands ei Sharp

- bands smeared due to hot gel -- Bändit smeared johtuu kuumaa geeliä

- bands fuzzy due to high voltage -- Bändit fuzzy johtuu korkea jännite

Solutions to Fuzzy bands and Un-sharp Bands: Ratkaisuja Fuzzy bändit ja YK-teräviä Bändit:

- decrease voltage or current, run in cold room, and prepare new running buffer. -- Lasku jännitteen tai nykyinen, run kylmään huoneeseen, ja valmistelemaan uutta näkyä puskuriin. ( heat causes the gel to lose its rigidity and its resolving power) (Lämpö aiheuttaa geeli menettää sen jäykkyyttä ja sen ratkaisemiseen teho)

- pre-soak transfer membrane in the appropriate transfer solution (determined by the membrane manufacturer) for the required length of time. -- Pre-liotus siirto kalvo on aiheellista siirtää ratkaisu (määräytyy sen mukaan, kalvojen valmistaja) vaadittua aikaa.