Welcome to Molecular Station! Tervetuloa Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Sinun täytyy rekisteröityä ennen kuin voit lähettää meidän foorumeilla tai käyttää lisätoimintoja. Register Now! Register Now! Its Free and Fast! Sen vapaata ja nopeaa!

Already registered? Oletko jo rekisteröitynyt? Login now below. Login nyt alla.

User Name: User Name:

Password: Salasana:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Jo rekisteröity ja Unohditko salasanasi? Click below to recover it. Klikkaa alhaalta sitä takaisin.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Liity nyt - se on nopeaa ja ilmaista!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station on suurin verkosto, tutkijat, tiedemiehet ja tieteen ystäville!

Recent Forum Posts Uusi Forum Posts

Protein Protocols Proteiini pöytäkirjat

Protein Encyclopedia Proteiini Encyclopedia

Protein Bioinformatics Protein Bioinformatics

Protein Science Forum Protein Science Forum

Protein Blog Proteiini Blog

DNA News DNA Uutiset

Protein Determination by UV Absorption Protocol Proteiinin määritys UV Absorptio pöytäkirjan

Protein Determination by UV Absorption Protocol, ( Modified from the protocol by Alastair Aitken and Michčle P. Learmonth) Proteiinin määritys UV Absorptio pöytäkirjan (muutettu pöytäkirjan Alastair Aitken ja Michčle s. Learmonth)

Materials for UV Protein Concentration Materiaalit, UV-Proteiini Pitoisuus

1. 0.1 M K2SO4 (pH 7.0). 0,1 M K2SO4 (pH 7,0).
2. 5 mM potassium phosphate buffer, pH 7.0. 5 mM kalium fosfaattipuskuri, pH 7,0.
3. Nonionic detergent (0.01% Brij 35) Nonionic pesuainetta (0,01% Brij 35)
4. Guanidinium-HCl.
5. 0.2-µm Millipore (Watford, UK) filter. 0,2-μ m Millipore (Watford, UK) suodattimen.
6. UV-visible spectrometer: The hydrogen lamp should be selected for maximum     intensity UV-valossa näkyviä spectrometer: vety lampun tulisi valita enintään intensiteetti
at the particular wavelength. on erityisesti aaltopituudella.
7. Cuvets, quartz, for <215 nm. Cuvets, kvartsi, <215 nm.

Protein Concentration UV Method Proteiinin pitoisuus UV Menetelmä

Estimation of Protein by Near UV Absorbance (280 nm): Arvio Proteiini, Lähellä UV Absorbance (280 nm):

1. A reliable spectrophotometer is necessary. Luotettava spektrofotometri on tarpeen. The protein solution must be diluted in the Proteiinin ratkaisu on laimennettava,
buffer to a concentration that is well within the accurate range of the instrument (see Notes 1 and 2). puskuriliuos, jonka pitoisuus, joka on hyvin tarkka valikoima väline (ks. huomautukset 1 ja 2).

2. The protein solution to be measured can be in a wide range of buffers, so it is usually no problem to find one that is appropriate for the protein which may already be in a particular buffer required for a purification step or assay for enzyme activity, for example (see Notes 3 and 4). Proteiinin ratkaisu voidaan mitata voi olla monenlaisia puskurien, niin se ei yleensä ole ongelma löytää joka on tarkoituksenmukaista, että proteiinia, joka voi jo olla tietty puskuri, joka edellyttää puhdistus askel tai Määritystä varten entsyymin toimintaa, esimerkki (katso alaviitteet 3 ja 4).

3. Measure the absorbance of the protein solution at 280 nm, using quartz cuvets or cuvets that are known to be transparent to this wavelength, filled with a volume of solution sufficient to cover the aperture through which the light beam passes. Mitataan absorbanssi valkuaispitoisuuden ratkaisu on 280 nm, käyttäen kvartsi cuvets tai cuvets, että tiedetään olevan avoimia tämän aallonpituus, täytetään tilavuus liuosta riitä kattamaan aukkoa, jonka kautta valonsäteestä kulkee.

4. The value obtained will depend on the path length of the cuvet. Saatu arvo riippuu polun pituus, cuvet. If not 1 cm, it must be Jos ei ole 1 cm, se on
adjusted by the appropriate factor. oikaistu sopiva tekijä. The Beer-Lambert law states that: A (absorbance) = ε cl where ε = extinction coefficient, c = concentration in mol/L and l = optical path length in cm. The Beer-Lambertin lain mukaan: A (absorbanssi) = ε cl, jossa ε = extinction coefficient, c = pitoisuus mol / l ja l = optisen matkan pituus cm. Therefore, if ε is known, measurement of A gives the concentration directly, ε is Näin ollen, jos ε on tiedossa, mittaus-A on antanut keskittymä suoraan, ε on
normally quoted for a 1-cm path length. tavallisesti lainattu: 1 cm polun pituus.

5. The actual value of UV absorbance for a given protein must be determined by some absolute method, eg, calculated from the amino acid composition, which can be determined by amino acid analysis. Todellinen arvo UV-absorbanssi on tietyn proteiinin on määritettävä noin absoluuttinen menetelmä, esim. lasketaan sen aminohappo koostumus, joka voidaan määrittää aminohappo analyysi. The UV absorbance for a protein is then calculated according to the following formula: A280 (1 mg/mL) = (5690nw + 1280ny + 120nc)/M UV-absorptio-proteiini on sitten lasketaan seuraavan kaavan mukaan: A280 (1 mg / ml) = (5690nw + 1280ny + 120nc) / M
where nw, ny, and nc are the numbers of Trp, Tyr, and Cys residues in the polypeptide of jos NW, ny, ja nc ovat numerot trp, Tyr, ja Cys jäämiä, polypeptideihin,
mass M and 5690, 1280 and 120 are the respective extinction coefficients for these residues (see Note 5). massa M ja 5690, 1280 ja 120 ovat kunkin sukupuutto kertoimia näitä jäämiä (katso huomautus 5).

See also Protein Concentration Protocols from other labs . Katso myös Proteiinin pitoisuus pöytäkirjojen muista labs.

Other Protein Articles: Muut Proteiini artikkelit:

Western Blot Home Western Blot Etusivu

Immunoprecipitation Home Immunoprecipitation Etusivu

SDS-PAGE Gel Electrophoresis SDS-PAGE geelielektroforeesilla

Protein Separation Proteiini erottaminen

Protein Purification Proteiini Puhdistus

Protein Identification Protein Identification

Recombinant Protein Expression Systems Rekombinantti Protein Expression Systems

Protein Expression Techniques Protein Expression Techniques