Welcome to Molecular Station! Tervetuloa Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Sinun täytyy rekisteröityä ennen kuin voit lähettää meidän foorumeilla tai käyttää lisätoimintoja. Register Now! Register Now! Its Free and Fast! Sen vapaata ja nopeaa!

Already registered? Oletko jo rekisteröitynyt? Login now below. Login nyt alla.

User Name: User Name:

Password: Salasana:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Jo rekisteröity ja Unohditko salasanasi? Click below to recover it. Klikkaa alhaalta sitä takaisin.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Liity nyt - se on nopeaa ja ilmaista!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station on suurin verkosto, tutkijat, tiedemiehet ja tieteen ystäville!

Recent Forum Posts Uusi Forum Posts

Protein Protocols Proteiini pöytäkirjat

Protein Encyclopedia Proteiini Encyclopedia

Protein Bioinformatics Protein Bioinformatics

Protein Science Forum Protein Science Forum

Protein Blog Proteiini Blog

DNA News DNA Uutiset

Lowry Protein Assay Protocol Lowry Proteiini Pitoisuus pöytäkirjan

Protein Concentration Determination by the Lowry Prtoein Assay Protocol Proteiinin pitoisuus määrittäminen, joita Lowry Prtoein Pitoisuus pöytäkirjan

Materials Materiaalit

1. Complex-forming reagent: Prepare immediately before use by mixing the following stock solutions in the proportion 100:1:1 (by vol), respectively: Complex muodostavien reagenssi: Valmistetaan välittömästi ennen käyttöä sekoittamalla seuraavat varastossa ratkaisuja siinä suhteessa, 100:1:1 (tilavuusprosentteina), seuraavasti:
Solution A: 2% (w/v) Na2CO3 in distilled water. Liuos A: 2% (w / v) Na2CO3 tislatulla vedellä.
Solution B: 1% (w/v) CuSO4·5H2O in distilled water. Liuos B: 1% (w / v) CuSO4 5H2O tislatulla vedellä.
Solution C: 2% (w/v) sodium potassium tartrate in distilled water. Ratkaisu C: 2% (w / v) natrium-kalium tartraatti tislatulla vedellä.

2. Prepare 2 N NaOH. Valmistetaan 2 N NaOH: ta.

3. Folin reagent (commercially available): Use at 1 N concentration. Folin reagenssia (kaupallisesti saatavilla): Käytä aikaa 1 N-pitoisuus.

4. Standards: Use a stock solution of standard protein (eg, bovine serum albumin fraction V) containing 2 mg/mL protein in distilled water, stored frozen at –20°C. Standardit: Käytä varastossa ratkaisu standardin proteiini (esim. naudan seerumin albumiini fraktio V), jotka sisältävät 2 mg / ml proteiinia tislattua vettä, varastointi jäässä, -20 ° C. Prepare standards by diluting the stock solution with distilled water as follows: Valmista standardeja laimentamalla kantaliuosta ratkaisu tislatulla vedellä seuraavasti:

Stock solution   (µL)     0         2.5      5          12.5     25        50        125      250      500 Kanta-liuosta (μ l) 0 2,5 5 12,5 25 50 125 250 500

Water                (µL)     500      498     495      488      475      450      375      250      0 Water (μ l) 500 498 495 488 475 450 375 250 0
Protein conc. Proteiini conc.    (µg/mL) 0          10       20        50        100      200      500      1000    2000 (μ g / mL) 0 10 20 50 100 200 500 1000 2000

Method Menetelmä

1. To 0.1 mL of sample or standard, add 0.1 mL of 2 N NaOH. Voit 0,1 ml näytettä tai standardi, lisätään 0,1 ml: ssa 2 N NaOH: ta. Hydrolyze at 100°C for 10 min in a heating block or boiling water bath. Hydrolyze 100 ° C: 10 min, lämmitys estää tai vesihauteeseen.

2. Cool the hydrolysate to room temperature and add 1 mL of freshly mixed complex-forming reagent. Cool hydrolysaattiin huoneenlämpöiseksi ja lisätään 1 ml tuoreeltaan sekaisin monimutkainen muodostavien reagenssia. Let the solution stand at room temperature for 10 min. Annetaan liuoksen seistä huoneenlämmössä 10 min.

3. Add 0.1 mL of Folin reagent, using a vortex mixer, and let the mixture stand at room temperature for 30–60 min (do not exceed 60 min). Lisää 0,1 ml Folin reagenssin avulla vortex-sekoittimella, ja anna seoksen seistä huoneenlämmössä 30-60 min (älä ylitä 60 min).

4. Read the absorbance at 750 nm if the protein concentration was below 500 µg/mL or at 550 nm if the protein concentration was between 100 and 2000 µg/mL. Lue absorbanssi 750 nm, jos proteiinin pitoisuus oli alle 500 μ g / ml tai 550 nm, jos proteiinin pitoisuus oli 100 ja 2000 μ g / ml.

5. Plot a standard curve of absorbance as a function of initial protein concentration and use it to determine the unknown protein concentrations. Piirretään standardi käyrä absorbanssi on tehtävä alkuperäisen proteiinin pitoisuus ja käyttää sitä määrittää tuntemattoman proteiinin pitoisuudet.

Lowry Method References Lowry Menetelmä Viitteet

Based on protocol by Jakob H. Waterborg. Perustuen pöytäkirjan Jakob H. Waterborg.

Lowry et al. J. Lowry et al. J. Biol. Biol. Chem . Chem. 193: 265-275 (1951) 193: 265-275 (1951)

Related Protein Concentration Articles Related Protein Pitoisuus artikla

Lowry Method Protocol Lowry Menetelmä pöytäkirjan

Protein Concentration Proteiinin pitoisuus

Protein Concentration Protocol Proteiinin pitoisuus pöytäkirjan

Lowry Protein Assay Lowry Proteiini Pitoisuus

Bradford Assay Bradford Pitoisuus

Bradford Assay Protocol Bradford Pitoisuus pöytäkirjan

Protein Articles: Proteiini-artikkelit:

Western Blot Home Western Blot Etusivu

Immunoprecipitation Home Immunoprecipitation Etusivu