Immunoprecipitation Protocol Immunoprecipitation pöytäkirjan

Immunoprecipitation and protocols. Immunoprecipitation ja pöytäkirjat.

Basic Immunoprecipitation Protocol IP: Basic Immunoprecipitation pöytäkirjan IP:

1. Treat your cells Treat your solujen

2. Harvest cells by adding 500 uL of solubilizing buffer, scrape and pass through syringe a 21-gauge needle X5 times to homogenize. Harvest solut lisäämällä 500 ul-solubilizing puskuri, haalimaan ja läpäisevät ruisku 21-gaugen neulalla X5 kertaa homogenoidaan.

3. Conduct a TCA precipitation (this will be used to normalize if you radiolabeled the cells eg with S-35) Järjestää TCA sademäärä (tämä tullaan käyttämään normalisoida jos radioaktiivisesti solujen esim. S-35)

4. Pre-clearing: Pre-clear by adding 2 uL of X, mouse or rabbit or goat serum ( where X is the animal species in which the primary antibody was raised ) to whole samples and incubate in a rotator for 30 minutes at room temperature. Pre-selvitys: Pre-Vapaa lisäämällä 2 ul X, hiiren tai kanin tai vuohen seerumista (jossa X on eläinlajit, joissa ensisijainen vasta-aine on esitetty) koko näytteitä ja inkuboidaan joka pyöritin 30 minuutin ajan huoneenlämmössä.

5. Remove X serum by incubating with 30 uL immunoprecipitin with 30 minutes rotation at room temperature. Poista X-seerumi on itämisvaiheessa kanssa 30 ul immunoprecipitin kanssa 30 minuuttia kierto huoneenlämmössä.

6. Centrifuge samples for 3 minutes at 13, 000 rpm. Sentrifugoidaan näytteitä 3 minuuttia 13, 000 rpm.

7. After centrifugation, add 5 uL of primary antibody ( X anti-Y specific protein, where Y is the antibody raised in an animal for your protein of interest) to the supernatants and incubate overnight at 4 degrees C. Kun sentrifugointi, lisätään 5 ul alkutuotannon vasta-aine (X anti-Y erityisiä proteiineja, jossa Y on vasta esiin eläimen oman proteiinin korot), supernatants ja inkuboidaan yön yli 4 astetta C.

8. Add 100 uL of immunoprecipitin to samples. Lisää 100 ul-immunoprecipitin näytteet. Alternatively you can use Zysorbin (Invitrogen). Vaihtoehtoisesti voit käyttää Zysorbin (Invitrogen). (Zysorbin requires some minor changes to the protocol) (Zysorbin edellyttää joitakin pieniä muutoksia, protocol)

9. Centrifuge at 13, 000 rpm for 3 minutes. Sentrifugoidaan kiihtyvyydellä 13 000 rpm: n kierrosnopeudella 3 minuuttia. Remove the supernatant. Poista supernatantti.

10. Wash pellet 3 X with 1 mL of cold IP wash buffer (add protease inhibitors to wah buffer prior to use) with shaking for 5-10 minutes between each wash. Pese pelletti 3 X 1 ml kylmää IP pese-puskuriin (lisäys proteaasi-wah-puskuri ennen käyttöä) ravistamalla varten 5-10 minuuttia välillä kunkin peseytyä.

11. Use this pellet to run on a SDS-PAGE gel. Käytä tätä pelletin näyttää, SDS-PAGE-geeliä. You can add SDS Sample Buffer (protein loading buffer) to this and load on gel directly after boiling. Voit lisätä SDS Sample Buffer (proteiini lastaus-puskuri) ja kuormitus-geeliä suoraan jälkeen keittämällä.

Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | © 2005-2007 molekyylibiologian Station.com, Kaikki oikeudet pidätetään.

Send this page to a friend Send this page to a friend

Bioinformatics, Protocols, DNA RNA Protein Proteomics Bioinformatiikka, pöytäkirjat, DNA-RNA-Proteiini proteomiikka

Intracellular Stations Solunsisäiset asemat

Immunoprecipitation Protocol Immunoprecipitation pöytäkirjan

Basic Immunoprecipitation Protocol IP: Basic Immunoprecipitation pöytäkirjan IP: