Welcome to Molecular Station! Tervetuloa Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Sinun täytyy rekisteröityä ennen kuin voit lähettää meidän foorumeilla tai käyttää lisätoimintoja. Register Now! Register Now! Its Free and Fast! Sen vapaata ja nopeaa!

Already registered? Oletko jo rekisteröitynyt? Login now below. Login nyt alla.

User Name: User Name:

Password: Salasana:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Jo rekisteröity ja Unohditko salasanasi? Click below to recover it. Klikkaa alhaalta sitä takaisin.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Liity nyt - se on nopeaa ja ilmaista!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station on suurin verkosto, tutkijat, tiedemiehet ja tieteen ystäville!

Recent Forum Posts Uusi Forum Posts

FACS

The FACS Technique The FACS Technique

Resting lymphocytes comprise many functional subpopulations, which are identified and distinguished from each other on the basis of heir differential expression of cell surface proteins, which can be detected using specific antibodies. Lepovaiheen lymfosyyttien monia toiminnallisia eläinryhmät, jotka on tunnistettu ja ne eroavat toisistaan sen perusteella, perillinen erosta ilmaus solun pinnan proteiineja, jotka voidaan havaita käyttämällä erityisiä vasta-aineita.

Flow Cytometry Flow Cytometry

A powerful tool for defining and quantifying lymphocytes is the flow cytometer, which detects and counts individual cells passing in a stream through a laser beam. Tehokas keino määritellä ja määrällisesti lymfosyyttien on flow cytometer, joka tunnistaa ja laskee yksittäisten solujen ohimennen, puroa kautta laserhitsaus. A flow cytometer equipped to separate the identified cells is called a fluorescence-activated cell sorter (FACS). A flow cytometer varustettu erillisellä havaittuja soluja kutsutaan fluoresenssi-aktivoitu cell sorter (FACS). These instruments are used to study the properties of cell subsets identified using monoclonal antibodies to cell-surface proteins. Näitä välineitä käytetään tutkimaan ominaisuuksia cell subsets tunnistettu käyttäen monoklonaalisia vasta-aineita solun pinnan proteiineja. Individual cells within a mixed population are first tagged by treatment with specific monoclonal antibodies labeled with fluorescent dyes, or by specific antibodies followed by labeled anti-immunoglobulin antibodies. Yksittäisiä soluja, joka sekoittaa väestöstä on ensin tagged jonka hoidon spesifisiä monoklonaalisia vasta-aineita on merkintä fluoresoivia väriaineita tai erityisiä vasta-aineita, jota seuraa nimeltä anti-immunoglobuliini vasta-aineita. The mixture of labeled cells is then forced with a much arger volume of saline through a nozzle, creating a fine stream of liquid containing cells spaced singly at intervals . Seosta nimeltä soluja on sitten pakko kanssa paljon arger määrä keittosuolaliuosta kautta suutin, luoda kauniita stream nestettä sisältävät solut jakautuvat yksittäin väliajoin. As each cell passes through a laser beam it scatters the laser light, and any dye molecules bound to the cell will be excited and will fluoresce. Koska jokainen solu läpäisee laserhitsaus se scatters laserin valoa, ja kaikki väriaine molekyylejä sidottu soluun on innoissaan ja fluoresce.

Sensitive photomultiplier tubes detect both the scattered light, which gives information on the size and granularity of the cell, and the florescence emissions, which give information on the binding of the labeled monoclonal antibodies and therefore on the expression of cell-surface proteins by each cell. Herkät photomultiplier putket havaita sekä sironnutta valoa, joka antaa tietoja koon ja rakeinen, solun, ja florescence päästöjä, jotka antavat tietoa siitä, sitoutuminen merkitty monoklonaalisia vasta-aineita ja näin ollen ilmaus solun pinnan proteiineja kunkin solun . In the cell sorter, the signals passed back to the computer are used to generate an electric charge, which is passed from the nozzle through the liquid stream at the precise time that the stream breaks up into droplets, each containing no more than a single cell; droplets containing a charge can then be deflected from the main stream of droplets as they pass between plates of opposite charge, so that positively charged droplets are attracted to a negatively charged plate, and vice versa. Kun solun sorter, signaalit siirretään takaisin tietokoneeseen käytetään luoda sähkövaraus, joka on Siirtoasetukset suuttimen kautta nesteen stream klo tarkka aika, että stream taukoja ylös pisaroita, joista kukin sisältää enintään yhden solun ; Pisarat, joka sisältää maksu voidaan tällöin poiketa tärkeimmät stream pisaroiden koska ne kulkevat välillä kilpiä päinvastainen maksutta, niin että positiivisesti varautuneet pisarat ovat houkutelleet on negatiivisesti varattu levy, ja päinvastoin. In this way, specific subpopulations of cells, distinguished by the binding of the labeled antibody, can be purified from a mixed population of cells. Tällä tavoin erityinen eläinryhmät solujen, erottaa sitova, jonka otsikkona on vasta-aine voi olla puhdistettu osoitteesta sekalainen väestö soluja. Alternatively, to deplete a population of cells, the same fluorochrome can be used to label different antibodies directed at marker proteins expressed by the various undesired cell types. Vaihtoehtoisesti, vähennä väestön solujen, sama fluorochrome voidaan merkitä erilaisia vasta-aineita suunnattu merkkiaine proteiinit ovat ilmaisseet eri epätoivottuun solutyyppejä.

Cell Sorting Cell Lajittelujätteet

The cell sorter can be used to direct labeled cells to a waste channel, retaining only the unlabeled cells. The cell sorter voidaan käyttää suoraan nimeltä solujen jäte-kanava, säilyttäen vain otsikko soluihin. When cells are labeled with a single fluorescent antibody, the data from flow cytometer are usually displayed in the form of a histogram of fluorescence intensity vs. cell numbers. Kun solut ovat merkinneet yhdellä fluoresoivalla vasta-aine, tiedot flow cytometer ovat yleensä näytetään muodossa histogrammin fluoresenssin intensiteetti vs. solujen lukumäärän. If two or more antibodies are used, each coupled to different fluorescent dye, then the data are more usually displayed in he form of a two-dimensional scatter diagram or as a contour diagram, where the fluorescence of one dye-labeled antibody is plotted against that of a second, with the result that a population of cells labeling with one antibody can be further subdivided by its labeling with the second antibody. Jos kaksi tai useampia vasta-aineita käytetään, kukin kytketty eri fluoresoiva väri, niin tiedot ovat yleensä näytetään hän muodossa kaksiulotteinen scatter diagram tai sen ympärys kaavio, jossa fluoresenssin One Dye-merkkisissä vasta-aine on funktiona että toinen, sillä seurauksella, että väestön solujen Labeling yhden vasta-aine voidaan edelleen jakaa alaluokkiin sen Labeling kanssa toisen vasta-aine. By examining large numbers of cells, flow cytometry can give quantitative data on the percentage of cells bearing different molecules. Komissio tutkii suuria määriä soluja, flow cytometry voi antaa määrällisiä tietoja siitä, miten suuri prosenttiosuus soluja, joissa eri molekyylejä. As the power of FACS technology has grown, progressively more antibodies labeled with distinct fluorescent dyes can be used at the same time. Kuten valta FACS teknologia on kasvanut asteittain enemmän vasta-aineita on merkintä erilliset fluoresoivia väriaineita voidaan käyttää samaan aikaan.

Three, four and even five color analyses can now be handled by very powerful machines Kolme, neljä tai jopa viisi väri analyysit voidaan nykyisin hoitaa hyvin voimakas koneiden

FACS Protocols FACS pöytäkirjat