Welcome to Molecular Station! Tervetuloa Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Sinun täytyy rekisteröityä ennen kuin voit lähettää meidän foorumeilla tai käyttää lisätoimintoja. Register Now! Register Now! Its Free and Fast! Sen vapaata ja nopeaa!

Already registered? Oletko jo rekisteröitynyt? Login now below. Login nyt alla.

User Name: User Name:

Password: Salasana:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Jo rekisteröity ja Unohditko salasanasi? Click below to recover it. Klikkaa alhaalta sitä takaisin.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Liity nyt - se on nopeaa ja ilmaista!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station on suurin verkosto, tutkijat, tiedemiehet ja tieteen ystäville!

Recent Forum Posts Uusi Forum Posts

Automated Edman Degradation Automatisoidut Edman Hajoaminen

Amino Acid Sequences can be determined by Automated Edman Degradation Aminohappo Sequences voidaan määrittää automaattisesti Edman Hajoaminen

The amino acid composition of the peptide is determined.  The peptide is hydrolyzed into its constituent amino acid by heating it in 6 N HCl at 110°C for 24 hours.  Stanford Moore and William Stein showed that amino acids in hydrolysates can be separated by ionexchange chromatography on columns of sulfonated polystyrene and quantitated by reacting them with ninhydrin. The aminohappo koostumus sekä peptidi on määritetty. Peptidi on hydrolysoituu sen osatekijän aminohappo lämmittämällä sitä 6 N HCl at 110 ° C: ssa 24 tuntia. Stanford Moore ja William Stein osoitti, että aminohapot hydrolysaateista voidaan erottaa toisistaan, ionexchange kromatografia-sarakkeen sulfonated polystyreenin ja quantitated reagoimalla heille ninhydrin.

Amino acids treated this way give an intense blue color, except for praline, which gives a yellow color because it contains a secondary amino group.  The concentration of amino acid in a solution is proportional to the optical absorbance of the solution after heating it with ninhydrin.  This technique can detect a microgram (10nmol) of an amino acid, which is about the amount present in a thumbprint. Aminohapot kohdellaan tällä tavoin antaa sinistä väriä, lukuun ottamatta praliini, joka tuo keltainen väri, koska se sisältää johdetun amino-ryhmä. Pitoisuus aminohappo liuoksessa, joka on suhteutettu optinen absorptio ratkaisu lämmityksen jälkeen se ninhydrin . Tämä tekniikka voi havaita mikrogramma (10nmol) on aminohappo, joka on määrä esittää, thumbprint.

As little as a nanogram (10 pmol) of an amino acid can be detected by means of fluorescamine, which reacts with the a-amino group of a highly fluorescent product.  The identity of the amino acid is revealed by its elution volume, which in the volume of buffer used to remove the amino acid from the column. Niin vähän kuin nanogrammoina (10 pmol) on aminohappo voidaan havaita avulla fluorescamine, joka reagoi A-amino ryhmä erittäin fluoresoiva tuote. Henkilöllisyys, aminohappo on paljastanut sen Eluutiotilavuuden, joka volyymi puskuria käytetään poistamaan aminohappo-sarakkeessa.

The amino-terminal residue of a protein or peptide can be identified by labeling it with a compound that forms a stable covalent link. The amino-terminal jäämällä proteiini tai peptidi voidaan tunnistaa Labeling sillä on yhdiste, joka muodostaa vakaan covalent linkkiä.

Fluorodinitrobenzene (FDNB) was first used for this purpose by Frederick Sanger.  Dabsyl chloride is now commonly used because it forms intensely colored derivatives that can be detected with high sensitivity.  It reacts with an uncharged a-NH2 group to form a sulfonamide derivative that is stable under conditions that hydrolyze peptide bonds. Fluorodinitrobenzene (FDNB) käytettiin ensimmäisen kerran tätä tarkoitusta varten Frederick Sanger. Dabsyl kloridi on nyt yleisesti käytetty, koska se muodostaa voimakkaasti värillisiä johdannaiset, että ne voidaan havaita, joilla on korkea herkkyys. Reagoi kanssa jääneet a-NH2 ryhmä muodostaa sulfonamidi johdannaista, joka on vakaana olosuhteissa, hydrolyze peptidi joukkovelkakirjoja.

Although the dabsyl method for determining the amino-terminal residue is sensitive and powerful, it cannot be used repeatedly on the same peptide because the peptide is totally degraded in the acid-hydrolysis step.  Pehr Edman devised a method for labeling the amino-terminal residue and cleaving it from the peptide without disrupting the peptide bonds between the other amino acid residues.  The Edman degradation sequentially removes one residue at a time from the amino end of a peptide.  Phenyl isothiocyanate reacts with the uncharged terminal amino group of the peptide to form a phenylthiocarbamoyl derivative.  Then, under mildy acidic conditions, a cyclic derivative of the terminal amino acid is liberated, which leaves an intact peptide shortened by one amino acid. Vaikka dabsyl menetelmä, jolla määritetään amino-terminal jäännös on herkkä ja voimakas, sitä ei voida käyttää toistuvasti saman peptidi, koska peptidi on täysin huonontunut happo-hydrolyysi askel. Pehr Edman kehitetty menetelmä Labeling, että amino-terminal jäämien ja cleaving se, että peptidi puuttumatta peptidi joukkovelkakirjojen välillä muiden aminohappo jäämiä. Edman huonontumisen peräkkäin poistaa yhden jäämän kerrallaan alkaen amino loppuun peptidi. fenyyli-isotiosyanaatti reagoi kanssa jääneet terminal amino ryhmä, peptidi-muodossa yksi phenylthiocarbamoyl johdannainen. Sitten, mildy happamissa olosuhteissa, syklisiin johdannainen terminaalin aminohapon on vapautettu, joka jättää vahingoittumaton peptidi lyhentää yksi aminohappo.

Analyses of protein structures have been markedly accelerated by the development of sequenators, which are automated instruments for the determination of amino acid sequence.  In a liquid-phase sequenator, a thin film of protein in a spinning cylindrical cup is subjected to the Edman degradation.  The reagents and extracting solvents are passed over the immobilized film of protein, and the released PTH-amino acid is identified by high-pressure liquid chromatography (also called high-performance liquid chromatography, HPLC). Analyysit proteiinin rakenteita on huomattavasti nopeuttaa kehitystä sequenators, jotka ovat automaattisesti välineiden määrittämiseksi aminohappojärjestys. Nestettä-vaihe sequenator, ohut kalvo proteiinia pyörivältä lieriön Cup on tehtävä Edman huonontumista. Reagenssit ja kaivanut liuottimet ovat läpäisseet koko seisonta-elokuva proteiinin, ja vapautetaan PTH-aminohappo on yksilöity korkean paineen nestekromatografia (kutsutaan myös korkean suorituskyvyn nestekromatografia, HPLC).

One cycle of the Edman degradation is carried out in less than two hours.  By repeated degradations, the amino acid sequence of some fifty residues in a protein can be determined.  Gas-phase sequenators can analyze picomole quantities of peptides and proteins.  This high sensitivity makes it feasible to analyze the sequence of a protein sample eluted from a single band of an SDS-polyacrylamide gel. Yksi sykli on Edman huonontuminen on suoritettu vähemmän kuin kaksi tuntia. Toistuvasti heikkenemiseen, aminohapposekvenssin noin viisikymmentä jäämiin proteiini voidaan määrittää. KAASUFAASITEKNIIKAN sequenators voi analysoida picomole määriä peptidejä ja proteiineja. Tämä korkea herkkyys vuoksi on mahdollista analysoida, missä järjestyksessä proteiini näytteestä eluoidaan yhtenä bändi, joka SDS-polyakryyliamideista geeli.