Welcome to Molecular Station! Tervetuloa Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Sinun täytyy rekisteröityä ennen kuin voit lähettää meidän foorumeilla tai käyttää lisätoimintoja. Register Now! Register Now! Its Free and Fast! Sen vapaata ja nopeaa!

Already registered? Oletko jo rekisteröitynyt? Login now below. Login nyt alla.

User Name: User Name:

Password: Salasana:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Jo rekisteröity ja Unohditko salasanasi? Click below to recover it. Klikkaa alhaalta sitä takaisin.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Liity nyt - se on nopeaa ja ilmaista!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station on suurin verkosto, tutkijat, tiedemiehet ja tieteen ystäville!

Recent Forum Posts Uusi Forum Posts

DNA Protocols DNA: n pöytäkirjat

DNA Encyclopedia DNA Encyclopedia

DNA Bioinformatics DNA Bioinformatiikka

DNA Forum DNA-Forum

DNA Blog DNA-blogi

DNA News DNA Uutiset

DNA Books DNA Kirjat

SAP Shrimp Alkaline Phosphatase Protocol SAP Katkarapu alkalisen fosfataasin pöytäkirjan

Shrimp alkaline phosphatase or SAP, is an enzyme which catalyzes the dephosphorylation of 5’ phosphates from nucleic acid dephosphorylating RNA or DNA ends. Katkarapu alkalinen fosfataasi tai SAP, on entsyymi, joka catalyzes että dephosphorylation, 5 'fosfaatit, nukleiinihappo dephosphorylating RNA tai DNA päättyy.

Note that PCR products and also primers do not have phosphatases on their free ends, and therefore need to be phosphorylated prior to cloning if you are going to use a de-phosphorylated vector! Huomaa, että PCR-tuotteita ja myös pohjamaalit ei ole fosfataasit niiden vapaaseen päättyy, ja siksi niiden on oltava fosforyloituu ennen kloonausta, jos aiot käyttää de-fosforyloituu vektorin!

SAP is temperature unstable are therefore you can easily deactivate this enzyme (compared to CIP!). SAP on lämpötila epävakaa ovat siis voit helposti poistaa tämän entsyymin (verrattuna CIP!). SAP is deactivated with 65°C water bath incubation for 15 minutes. SAP on pois päältä kanssa 65 ° C vesihauteessa itämisaika on 15 minuuttia.

You get virtually no reaction. Saat käytännöllisesti katsoen mitään reaktiota. SAP requires at least 10mM MgCl2 (but optimal enzyme activity of shrimp alkaline phosphatase is at 20-25mM MgCl2) and it works well at pH 8.0. SAP edellyttää vähintään 10mm MgCl2: ta (mutta optimaalinen entsyymin aktiivisuus katkaravun alkalinen fosfataasi on 20-25mm MgCl2: ta) ja se toimii hyvin, kun pH on 8,0.

To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends Jotta dephosphorylate 1 pmol DNA päättyy

To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends (2.5 ug of 3 Kb plasmid), for 1hr at 37°C you need: Jotta dephosphorylate 1 pmol DNA-päät (2,5 UG, 3 Kb plasmidi), 1t 37 ° C: ssa, mitä tarvitset:

0.1 units of SAP for 5' overhangs, 0.2 units for blunt and 0.5 units for 3' over hangs. 0,1 yksikköä SAP-5 'overhangs, 0,2 yksikköä, kun tylppiä ja 0,5 yksikköä, kun 3' yli jumittuu.
Enzyme comes 1 unit per ul, Thus to be safe you can use approx.0.5 units for 2 ug. Entsyymi tulee 1 yksikköä kohti ul Näin on turvallinen, voit käyttää approx.0.5 yksikköä 2 UG.

TIPS: SAP Enzyme can be added directly to restriction digest! Vihjeitä: SAP Entsyymi voidaan lisätä suoraan rajoitus kokoelma! Thus the whole proceeding including restriction enzyme digestion, dephosphorylation, enzyme inactivation, ligation or 5’ end-labeling can be performed in one single tube by just adding the appropriate reagents. Niinpä koko menettelyn mukaan lukien rajoitus entsyymin ruoansulatukseen, dephosphorylation, entsyymin inaktivaation, dassa tai 5 "end-Labeling voidaan suorittaa yhden putken vain lisätään tarvittaessa reagensseja. This will allow you to save time and be efficient! Näin voit säästää aikaa ja olla tehokas!

Troubleshooting SAP Shrimp Alkaline Phosphatase? Vianetsintä SAP Katkarapu alkalisen fosfataasin?

Discuss and post questions about it in the Shrimp Alkaline Phosphatase and DNA Cloning Forum ! Keskustele ja lähettää kysymyksiä siitä, Katkarapu alkalinen fosfataasi ja DNA Kloonaus Forum!

Other DNA Protocols and Methods Muita DNA: n pöytäkirjoja ja menetelmät

DNA Cloning Guide DNA Kloonaus-opas

DNA Gel Electrophoresis DNA geelielektroforeesilla

Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Restriktio-entsyymianalyysi Digestion - kaikki mitä tarvitset tietää!

Genomic DNA Isolation Protocol Genomien DNA: n eristäminen pöytäkirjan

Baceteria DNA Isolation Baceteria DNA: n eristäminen

DNA Transformation - Contains History of DNA DNA Transformation - Sisältää Historia DNA

Find other protocols at our DNA Protocols external resource directory or see our DNA protocols . Etsi muita protokollia meidän DNA pöytäkirjojen ulkoisten resurssien hakemiston tai katso meidän DNA-protokollia.

Related:

DNA Microarray Protocols DNA Microarray pöytäkirjat

PCR Protocols PCR pöytäkirjat

DNA Bioinformatics DNA Bioinformatiikka

Visit DNA Bioinformatics . Käy DNA Bioinformatics.

DNA-Related News DNA-Related News

DNA News DNA Uutiset