Welcome to Molecular Station! Tervetuloa Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Sinun täytyy rekisteröityä ennen kuin voit lähettää meidän foorumeilla tai käyttää lisätoimintoja. Register Now! Register Now! Its Free and Fast! Sen vapaata ja nopeaa!

Already registered? Oletko jo rekisteröitynyt? Login now below. Login nyt alla.

User Name: User Name:

Password: Salasana:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Jo rekisteröity ja Unohditko salasanasi? Click below to recover it. Klikkaa alhaalta sitä takaisin.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Liity nyt - se on nopeaa ja ilmaista!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station on suurin verkosto, tutkijat, tiedemiehet ja tieteen ystäville!

Recent Forum Posts Uusi Forum Posts

DNA Protocols DNA: n pöytäkirjat

DNA Encyclopedia DNA Encyclopedia

DNA Bioinformatics DNA Bioinformatiikka

DNA Forum DNA-Forum

DNA Blog DNA-blogi

DNA News DNA Uutiset

DNA Books DNA Kirjat

Genomic DNA Isolation Protocol Genomien DNA: n eristäminen pöytäkirjan

Selecting a Genomic DNA Purification Method Valitseminen geenien DNA-Puhdistus Menetelmä

The goal of genomic DNA isolation depends on what the applications of the DNA after isolation. Tavoitteena geenien DNA: n eristäminen riippuu siitä, mitä sovelluksia DNA jälkeen erillään. Purity, source, quantity and quality of DNA are all issues that need to be addressed prior to genomic DNA extraction. Puhtaus, lähde, määrä ja laatu DNA ovat kaikki asioita, jotka on ratkaistava ennen geenien DNA: n eristämiseksi. A whole host of different methods, technologies and kits are available now to researchers to isolate genomic DNA from cells. Koko joukko erilaisia menetelmiä, tekniikoita ja-sarjat ovat saatavilla nyt tutkijoiden eristää geenien DNA-soluja.

• Quantity of DNA needed Määrä DNA tarvitaan
• Molecular weight and size of DNA Molekyylipaino ja koon DNA
• Purity of DNA required Puhtaus ja DNA: han
• Downstream applications of DNA Sovelluksiin DNA
• Time available Käytettävissä oleva aika
• Ease of DNA extraction technique or method Ease of DNA: n eristämiseksi tekniikkaa tai menetelmää
• Expense or money available Kustannuksella tai rahaa käytettävissä

Home-grown or laboratory specific DNA extraction methods often quite well for labs that have developed them and regularly use these protocols. Home grown tai laboratorio spesifisestä DNA: n louhinta menetelmät usein melko hyvin labs, että on kehitettävä ne ja käyttää säännöllisesti näitä protokollia.

Note however these methods lack standardization. Huomaa kuitenkin näiden menetelmien puute standardointia. Also the DNA yield and DNA quality are not always reproducible from one person to the next. Myös DNA: n tuottoa ja DNA: n laatu ei ole aina toistettavissa yksi henkilö seuraavan.

Background on Genomic DNA Isolation and Purification Tausta-Genomisten DNA: n eristäminen ja puhdistaminen

Generally, all methods involve the disruption and lysis of cells. Yleensä kaikki menetelmiin liittyy häiriöiden ja lysis soluja. This is followed sometimes by the removal of RNA (by RNAses, salt or other methods). Tämä on seurannut toisinaan poistaminen RNA (RNAses, suola-tai muut menetelmät). Choosing which method to use will depend on many selection factors including: Valitseminen, jotka menetelmän käyttö riippuu monesta valintaan vaikuttavat tekijät, mukaan lukien:

DNA is isolated from proteins by several methods including digestion of proteins by the enzyme proteinase K. Proteins are removed subsequently by salting-out, organic extraction, or binding of the DNA to a solid-phase support (such as an anion-exchange column or silica technology). DNA on eristetty proteiineja eri menetelmin, kuten ruuansulatusta, proteiineista entsyymin proteinaasi K. Proteiinit on poistettu sittemmin suolaus-out, orgaanisen uutto, tai sitovia, DNA, joka kiinteän faasin tukea (kuten ANIONINVAIHTOKOLONNI tai kvartsi-teknologia).

DNA is finally recovered by ethanol precipitation or isopropanol precipitation. DNA on lopulta toipui etanolin saostaminen tai isopropanolia sademäärä.

In general, the separation of DNA from cells and cellular components can be divided into four stages: Yleensä erottaminen DNA: solujen ja solutason komponentit voidaan jakaa neljään vaiheeseen:

1. Cell disruption Cell häiriöiden
2. Lysis of Cell Lysis-Cell
3. Removal of Proteins and Contaminants Removal proteiinien ja epäpuhtauksien
4. Recovery of DNA Recovery of DNA

In some genomic DNA isolation protocols, stages 1 and 2 are combined. Joidenkin geenien DNA: n eristäminen pöytäkirjat, vaiheet 1 ja 2 on yhdistetty.

Materials Needed for Genomic DNA Extraction Method Materiaalit vaatima Genomisten DNA Extraction Method

Lysis Buffer for Genomic DNA Recipe: Lysis Buffer-Genomien DNA Resepti:

50 mM Tris-HCl, pH 8.0 50 mM Tris-HCl, pH 8,0
50mM EDTA 50mm EDTA
1% SDS 1% SDS
10mM NaCl 10mm NaCl

Genomic DNA Purification Method from Tissue Samples Genomien DNA Puhdistus menetelmän Tissue Näytteet

1. Select tissue sample to use. Valitse kudoksen näytteen käyttöä. Make sure the sample is properly prepared and kept on ice. Varmista, että näyte on asianmukaisesti valmisteltu ja pidetään jäällä. If the sample will not be used immediately for DNA extraction, then the samples must be stored properly in either -20°C freezer for longer term or 4°C for short term (few hours) usage. Jos näyte ei käytetä välittömästi, DNA: n eristämiseksi, näytteet on varastoitava asianmukaisesti joko -20 ° C pakastin pidemmän aikavälin tai 4 ° C: n lyhyen aikavälin (pari tuntia) käyttöä.
2. Cut tissue into smaller pieces. Cut kudoksen pienemmiksi palasiksi. For liver or other soft tissue, don't worry about making fine pieces. Maksan tai muiden pehmytkudosten, älkää olko huolissanne siitä, että sakon kappaletta.
3. Add tissue to a pre-cooled (dry ice) mortar, immediately add liquid nitrogen N2. Lisää kudosten ja ennalta-cooled (kuiva jää) laastin välittömästi lisätä nestemäinen typpi N2.
4. Begin to grind tissue into fine powder. Aloitettava jauhetaan kudoksen osaksi hienojakoista jauhetta. Add more Liq. Lisää Liq. N2 as needed. N2 kuin tarvitaan. Transfer cold powder to 30 ml tube, leave uncapped so N2 can evaporate. Siirto kylmä jauhetta 30 ml putki, jätä uncapped niin N2 voi haihtua.
5. Add 9 ml of per-warmed (5°C ) Lysis buffer and gently resuspend powder. Lisää 9 ml per-lämmitettävä (5 ° C) Lysis puskuri-ja varovasti resuspend jauhe.
6. Add 100 ul of 10mg/ml of Proteinase K, (ie, 100 ug in solution). Lisää 100 ul-10mg/ml proteinaasi K, (eli 100 UG-ratkaisu). Incubate 55°C 1-18 hours. Inkuboidaan 55 ° C: ssa 1-18 tuntia. Mix gently periodically. Sekoitetaan varovasti määräajoin. Add 100 ul of Proteinase K after first 2 hours, Optimum: 3 hours adding Proteinase K at 1.5 hours. Lisää 100 ul proteinaasi K kuluttua ensimmäisestä 2 tuntia, Optimum: 3 tuntia lisäämällä proteinaasi K aikaa 1,5 tuntia.
7. Treat sample very gently. Käsittele näyte hyvin varovasti. Add 1 ml of 3M Na0Ac (pH 4.0), 10 ml of warm (55°C ) phenol, mix gently but throughly for 5-10 minutes. Lisää 1 ml 3M Na0Ac (pH 4,0), 10 ml lämmintä (55 ° C) fenoli, sekoitetaan varovasti mutta perusteellisesti, 5-10 minuuttia.
8. Centrifuge samples for 15 minutes. Sentrifugoidaan näytteitä 15 minuuttia.
9. Repeat warm phenol extraction. Toista lämmin fenoli uuttamalla.
10. Extract with equal volume (10ml) phenol: CIA (1 part phenol:1 part CIA: CIA= 23 parts chloroform:1 part isoamyl alcohol) Poimi yhtä tilavuus (10 ml) fenoli: CIA (1 osa fenoli: 1 osa CIA: CIA: n = 23 osat kloroformia: 1 osa isoamyl alkoholi)
11. Extract with equal volume (10ml) CIA extraction Poimi yhtä tilavuus (10 ml) CIA: n uuttaminen
12. Upper phase should be relatively clear, If it contains large white clouts, or is very milky, (i) incubate at 68°C 15 min., and re-phenol extract, (ii) start again, but incubate longer with PK. Ylä-vaiheen pitäisi olla suhteellisen selkeä, jos se sisältää suuren valkoisen clouts, tai se on hyvin maitomaista, (i) Inkuboidaan 68 ° C 15 min., Ja uudelleen-fenoli-uutetta, (ii) aloittaa uudelleen, mutta inkuboidaan enää kanssa PK.
13. Transfer upper phase to new tube. Siirto ylemmän vaiheen uuteen putkeen. Add 2 volumes of cold ethanol and mix gently (Salt: Na0Ac is already in solution). Lisää 2 määriä kylmää etanolilla ja sekoitetaan varovasti (Salt: Na0Ac on jo ratkaisu). Using a hook and sealed pasteur pipet spool out DNA. Koukulla ja suljettu pasteur pipetoidaan spool ulos DNA: ta. Wipe off excess ethanol on the side of the tubes. Pyyhi pois ylimääräinen etanoli puolella putkien. Resuspend in 2-5 mls of TE. Resuspend, 2-5 MLS-TE. Make sure DNA is completely dissolved (leave on gentle shaker.) Varmista, että DNA on täysin liuennut (virkavapaalla lempeät ravistelija.)
14. Add RNase mix (100 ug of RNase A, 10U of RNaseT1). Lisää RNase mix (100 UG, RNase A, 10U, RNaseT1). Incubate 30 min 37°C. Inkuboidaan 30 min 37 ° C. ** You could add the RNase before the proteinase K, incubate at 37°C for 1 hour and then start proteinase digestion. ** Voisit lisätä RNase ennen proteinaasi K, inkuboidaan 37 ° C: ssa 1 tunti ja sen jälkeen alkaa proteinaasi ruuansulatusta. You could then skip step 15-. Voisit sitten skip askel 15 -.
15. Add 100 ug of Proteinase K, incubae 37°C 30 minutes. Lisää 100 UG proteinaasi K-incubae 37 ° C 30 minuuttia.
16. Add 1/10 vol. Lisää 1 / 10 tilavuusprosenttia. 3M Na0Ac, Phenol extract once, Phenol:CIA extract twice, CIA extract once. 3M Na0Ac, fenoli-uutetta kerran, Fenoli: CIA: n ote kahdesti, CIA otteen kerran.
17. Add 2.5 volumes of EtOH, put in -20°C 30 min. Lisää 2,5 tilavuusosaa EtOH, otettu -20 ° C 30 min. Centrifuge 20 min. Sentrifugoidaan 20 min.
18. Wash well with 70%, Remove all EtOH. Pese hyvin 70%, Poista kaikki EtOH. If you dry, Do Not over DRY. Jos sinulla kuiva, ei liian kuiva.
19. Resuspend carefully, slowly in1-2mls TE (Tris-EDTA buffer). Resuspend huolellisesti, hitaasti In1-2mls TE (Tris-EDTA-puskuri). (1x or 0.1x). (1x tai 0.1x).

Other DNA Protocols and Methods Muita DNA: n pöytäkirjoja ja menetelmät

DNA Cloning Guide DNA Kloonaus-opas

DNA Gel Electrophoresis DNA geelielektroforeesilla

Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Restriktio-entsyymianalyysi Digestion - kaikki mitä tarvitset tietää!

Genomic DNA Isolation Protocol Genomien DNA: n eristäminen pöytäkirjan

Baceteria DNA Isolation Baceteria DNA: n eristäminen

DNA Transformation - Contains History of DNA DNA Transformation - Sisältää Historia DNA

Find other protocols at our DNA Protocols external resource directory or see our DNA protocols . Etsi muita protokollia meidän DNA pöytäkirjojen ulkoisten resurssien hakemiston tai katso meidän DNA-protokollia.

Related:

DNA Microarray Protocols DNA Microarray pöytäkirjat

PCR Protocols PCR pöytäkirjat

DNA Bioinformatics DNA Bioinformatiikka

Visit DNA Bioinformatics . Käy DNA Bioinformatics.

DNA-Related News DNA-Related News

DNA News DNA Uutiset