Welcome to Molecular Station! Tervetuloa Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Sinun täytyy rekisteröityä ennen kuin voit lähettää meidän foorumeilla tai käyttää lisätoimintoja. Register Now! Register Now! Its Free and Fast! Sen vapaata ja nopeaa!

Already registered? Oletko jo rekisteröitynyt? Login now below. Login nyt alla.

User Name: User Name:

Password: Salasana:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Jo rekisteröity ja Unohditko salasanasi? Click below to recover it. Klikkaa alhaalta sitä takaisin.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Liity nyt - se on nopeaa ja ilmaista!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station on suurin verkosto, tutkijat, tiedemiehet ja tieteen ystäville!

Recent Forum Posts Uusi Forum Posts

Bookmark Bookmark Site Vedonvälittäjä vedonvälittäjä Site

Mycoplasma Contamination | Cell Culture Mycoplasma Vierasaineet | soluviljely

We include here for cell culture labs, information on mycoplasma contaminations and the latest mycoplasma forum discussions for all your contamination questions and discussions. Meidän sisältyy tästä saadaksesi soluviljely labs, tietoa Mycoplasma saastumista ja viimeisin Mycoplasma foorumin keskusteluja kaikkien teidän saastumiseen liittyvät kysymykset ja keskustelut.

Mycoplasma Background Mycoplasma Taustaa

Mycoplasmas are a genus of bacteria that lack a cell wall. Mycoplasmas ovat suvun bakteerien, että ei ole soluseinä. Due to a lack of a cell wall, they are resistant to many antibiotics including penicillin or other beta-lactam antibiotics that target cell wall synthesis. Puutteen takia on soluseinä, ne ovat vastustuskykyisiä monille antibiootteja, mukaan lukien penisilliinin tai muiden beta-laktaamiantibiootti antibioottien, että tavoite soluseinä synteesiä.

Mycoplasma are either parasitic or saprophytic. Mycoplasma ovat joko parasitic tai saprophytic. Several Mycoplasma are disease-causing in humans, including M. pneumoniae, which is an important cause of atypical pneumonia and other respiratory disorders, and M. genitalium, which is believed to be involved in pelvic inflammatory diseases. Useat Mycoplasma ovat tautia aiheuttavat ihmisillä, mukaan lukien M. pneumoniae, joka on tärkeä syy epätyypillinen keuhkokuume ja muut hengityselinten sairaudet, ja M. genitalium, joiden uskotaan olevan mukana lantion tulehduksellisia sairauksia. They may cause or contribute to some cancers. Ne voivat aiheuttaa tai edistää joidenkin syöpien.

Genus Mycoplasma Genus Mycoplasma

The genus Mycoplasma is one of several genera within the class Mollicutes. Suvun Mycoplasma on yksi useista sukujen-luokan Mollicutes. Mollicutes are bacteria which have small genomes, lack a cell wall and have a low GC-content (18-40 %). Mollicutes ovat bakteereita, jotka ovat pienten genomien, puuttuu soluseinä, ja niillä on alhainen GC-pitoisuus (18-40%).

There are over 100 recognized species of the genus Mycoplasma. Maassa on yli 100 tunnustettujen lajien suvun Mycoplasma. Their genome size ranges from 0.58 1.38 megabase-pairs. Heidän genomin koko vaihtelee 0,58 1,38 megabase-paria. Mollicutes are parasites or commensals of humans, animals (including insects), and plants; the genus Mycoplasma is by definition restricted to vertebrate hosts. Mollicutes ovat loisia tai commensals ihmisten, eläinten (hyönteiset mukaan lukien), ja kasvit; suvun Mycoplasma on määritelmän rajoitettu selkärankaisista isännistä. Cholesterol is required for the growth of species of the genus Mycoplasma as well as certain other genera of mollicutes. Kolesteroli on välttämätön kasvun lajien suvun Mycoplasma sekä eräiden muiden sukujen ja mollicutes. Their optimum growth temperature is often the temperature of their host if warmbodied (eg 37 degrees Celsius in humans) or ambient temperature if the host is unable to regulate its own internal temperature. Niiden optimaalinen kasvu lämpötila on usein lämpötila vastaanottavan jos warmbodied (esim. 37 astetta Celsius ihmisillä) tai huoneenlämmössä jos vastaanottava ei voi säännellä omaa sisäistä lämpötilaa. Analysis of 16S ribosomal RNA sequences as well as gene content strongly suggest that the mollicutes, including the mycoplasmas, are closely related to either the Lactobacillus or the Clostridium branch of the phylogenetic tree (Firmicutes sensu stricto). Analyysi 16S ribosomien RNA-sekvenssien sekä geenien sisältöä viittaavat vahvasti siihen, että mollicutes, mukaan lukien mycoplasmas, liittyvät läheisesti joko Lactobacillus tai Clostridium jompi kumpi phylogenetic tree (Firmicutes suppeassa merkityksessä).

Cell Lines and Mycoplasmas Solulinjoissa ja Mycoplasmas

In cell cultures, mycoplasmas may induce cellular changes, including chromosome aborations, changes in metabolism and cell growth. Vuonna soluviljelmillä, mycoplasmas voi aiheuttaa cellular muutokset, mukaan lukien kromosomi aborations, muutoksia aineenvaihdunnassa ja solujen kasvua. Severe mycoplasma infections may destroy a cell line or render expensive or precious cell lines useless. Vaikea Mycoplasma toksoplasmoosiin voi tuhota solulinja tai tehdä kalliita tai arvokas solulinjaa hyödytön.

Cell Culture Contamination with Mycoplasma Cell Kulttuuri saastuminen Mycoplasma

Mycoplasmas are often found in research laboratories as contaminants in cell culture. Mycoplasmas esiintyvät usein tutkimuslaboratorioiden kuin kontaminanttien soluviljely. Mycoplasmal cell culture contamination occurs due to contamination from individuals or contaminated cell culture medium ingredients. Mycoplasmal soluviljely saastuminen tapahtuu saastumisen vuoksi yksityishenkilöiltä tai saastunut soluviljelmän elatusaineen ainesosia.

Mycoplasma Detection Methods Mycoplasma Detection Methods

Mycoplasma cells are usually smaller than 1 µm and therefore quite difficult to detect with conventional microscopy methods. Mycoplasma solut ovat yleensä pienempiä kuin 1 μ m ja siksi melko vaikea havaita perinteisten mikroskopia menetelmiä. Detection techniques include: Detection tekniikoita muun muassa:

• PCR
• Real-time PCR Real-time PCR
• Plating on sensitive Agar Plating arkoihin Agar
• DNA stains including DAPI or or Hoescht Stain DNA piirteet mukaan lukien DAPI tai tai Hoescht Värjää

Hoechst Stain Mycoplasma Contamination Detection Protocol Hoechst Värjää Mycoplasma Vierasaineet Detection pöytäkirjan

A Hoechst (Sigma, catalog #:H6024) staining method for Mycoplasma: A Hoechst (Sigma, luetteloomme #: H6024) värjäys menetelmä Mycoplasma:

1. For Adherent cells, place a sterile cover glass in petri dish. For kiinnittyneet solut, paikka steriiliin kattamaan lasi petrimaljaan. Add 2-3 drops of cell suspension in the middle of coverglass (depending on the growth rate of your cells). Lisää 2-3 tippaa solususpension vuonna keskellä coverglass (riippuen kasvuvauhti teidän solut).
2. Then carefully add 2-3 ml of medium without disturbing the cells. Sitten lisätään varovasti 2-3 ml: n keskipitkän ilman häiritsevää soluihin. Grow the cells until they are 50 -70% confluent. Kasvatetaan soluja, kunnes ne ovat 50 -70% confluent.

Fixing Cells: Fixing solut:

1. Prepare cell Fixative which is a mix fo 3:1 Methanol : glacial acetic acid (M:AA). Valmistetaan solun fixative joka sekoitetaan 3:1 Metanoli: jääetikkaa (M: AA). Make sure you prepare this fresh before use. Varmista, että olet valmistella tämän tuoreen ennen käyttöä.
2. Discard medium from growing cells. Hävitä välineellä kasvaa soluja. Add 2 ml of the Methanol : glacial acetic acid M:AA solution dropwise onto the side of the plate (not directly onto the cells). Lisää 2 ml metanoli: jääetikkaa M: AA ratkaisu tipoittain onto puolella kilpi (ei suoraan väylälle solut). Swirl the plate and discard solution. Pyöritä levyä ja hävittämään ratkaisu.
3. Add 2 ml of M:AA, swirl and leave on for 2-3 minutes at room temperature. Lisää 2 ml M: AA, pyöritä ja lomaa varten 2-3 minuuttia huoneenlämmössä.
4. Discard M: AA solution and rinse with water Hävitä M: AA ratkaisu ja huuhdellaan vedellä
5. Leave to air dry (you can keep the plate until you are ready to stain) Hoecht stain (cat# 33258 from Sigma) stock concentration = 0.1 mg/ml in water You can filter sterilize at this stage using a 0.2uM filter Wrap container in aluminium foil Store at 4 oC Working solution Prepare fresh each time as necessary Make 1:1000 dilution (0.1 µg/ml) of stock in water Jätä ilmaan kuiva (voit pitää kilpi, kunnes olet valmis värjäytyvät) Hoecht värjäys (cat # 33258, Sigma) varastossa pitoisuus = 0,1 mg / ml vettä Voit suodattaa steriloida tässä vaiheessa käyttäen 0.2uM suodatin Wrap kontin alumiinifolio Store 4 ° C: ssa Working ratkaisu Valmista tuore joka kerta kuin se on tarpeen Tee 1:1000 laimentaen (0,1 μ g / ml) varastossa veteen

Staining Cells: Värjäysmenettely solut:

1. Add enough Hoechst stain to cover the entire cover slip (use 1-2ml for a small Petri dish). Lisää tarpeeksi Hoechst värjäytyvät kattamaan koko kattamaan liukastua (käytä 1-2ml on pieni petrimaljaan).
2. Leave the stain on for 45 minutes - 1 hour (in the dark). Jätä tahroja, 45 minuuttia - 1 tunti (pimeässä).
3. Rinse well with water. Huuhdo hyvin vedellä.
4. Mount on a microscope slide (mountant mix: 22 mM Citric Acid; 55.6 mM disodium phosphate; 50% glycerol, pH mix to 5.5) place a drop or two on cover slip (cells up) and place cover slip (cells down) on slide. Mount-mikroskoopin objektilasille (mountant Mix: 22 mm Sitruunahappo; 55,6 mM dinatriumfosfaatti, 50% glyseroli, pH-yhdistelmä 5.5) paikassa laskee tai kaksi kattamaan liukastua (solujen up) ja paikka kattamaan liukastua (solut alas) slide .
5. Visualise under fluorescence microscope Visualise nojalla fluoresenssi mikroskoopilla

Note: store Hoechst stain at 4oC at least, or aliquot into the freezer for long-term storage. Huomautus: Säilytä Hoechst värjäytyvät milloin 4oC vähintään, tai erä otetaan pakastimesta pitkäaikaiseen varastointiin.