Electroforesis del ARN

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Debido a la naturaleza del ARN, la separación de ARN en la electroforesis también llamada de RNA de los geles es un dígito binario diferente que el de la DNA.

El ARN que es generalmente solo trenzado puede plegable sobre sí mismo para formar las estructuras secundarias fuertes y estables. Esto es un problema cuando usted necesita separar el ARN en un gel.

También, doble el ARN trenzado (dsRNA) por ejemplo el ARN: Los híbridos del ARN son absolutamente estables. DsRNA y ARN: Los híbridos del ARN tienen los elementos de la horquilla y otras estructuras secundarias que son resistentes a desnaturalizar las condiciones capaces de desnaturalizar la DNA.

Métodos de separación de la electroforesis del gel para el ARN

Los geles usados para separar la DNA tal como agarosa ejecutada con el almacenador intermediario de TAE o de TBE son útiles para el análisis del ARN, no obstante el ARN se desnaturaliza generalmente antes de electroforesis usando la desnaturalización de los geles y la desnaturalización de condiciones.

Las FREGONAS o las condiciones del formaldehído se utilizan generalmente para los protocolos del análisis y del hibridación del ARN.

Protocolo de la electroforesis del gel del ARN de las FREGONAS

La electroforesis del gel de las FREGONAS emplea el almacenador intermediario de las FREGONAS mientras que un almacenador intermediario corriente para separar las moléculas [del ARN] en una agarosa se gelifica.

10X ALJOFIFA el almacenador intermediario

almacenador intermediario del cargamento 6X: 0.25% (peso/volumen) G anaranjados, glicerol del 30%, 1.2% SDS, 1X ALJOFIFAN

Almacenador intermediario de la electroforesis: FREGONAS 1X

Gel: Agarosa del 1%, FREGONAS 1X

• Desnaturalice las muestras del ARN en el almacenador intermediario del cargamento por 5-10 minutos en 75-80°C antes de electroforesis.

Protocolo de la electroforesis del gel del ARN del formaldehído

Prepare y ensamble el siguiente:

receta corriente del almacenador intermediario 10X: Agregue el siguiente:

• 0.4 FREGONAS DE M
• 0.1 Acetato del sodio de M
• EDTA de 10 milímetros (disódico)
• Ajuste el pH a 7.0 usando NaOH o el ácido acético glacial CH3COOH

receta del almacenador intermediario del ARN del cargamento 10X

Para preparar el almacenador intermediario del ARN del cargamento 10X agregue el siguiente:

• 0.35% (peso/volumen) Orange G
• el 30% (peso/volumen) Ficoll 400
• EDTA de 1 milímetro (disódico)

Para que almacenador intermediario corriente diluído 10X del almacenador intermediario de la electroforesis haga 1X el almacenador intermediario corriente.

Gel de la agarosa

Prepare el gel de la agarosa del ARN del 1%. Esto se prepara con el almacenador intermediario 1X y el formaldehído corrientes del 7%

Receta para el gel de la agarosa del ARN del 1%

Para un gel de 20 ml agregue el siguiente:

• 0.2 agarosas de g
• 2 almacenador intermediario corriente del ml 10X
• agua del ultrapure 14.2ml

La microonda por 45 segundos, entonces permite refrescarse. Agregue 3.8 ml de formaldehído del 37% y después vacie en la bandeja del bastidor con los peines.

Para preparar el ARN para cargar sobre receptores de papel combine el siguiente:

• 3.5 µl de cada muestra del ARN con:
• Formamida de 10 µl
• 3.5 Formaldehído de µl el 37%
• 1 almacenador intermediario corriente de µl 10X
• 2 almacenador intermediario del cargamento de µl 10X

Desnaturalice el ARN en los almacenadores intermediarios por 10 minutos en 65-75°C. Entonces cargue sobre receptores de papel refrescados y bien formados del gel.

Referencias para la electroforesis del ARN

1. Sambrook, J., y otros (1989). Reproducción molecular: Un manual del laboratorio. 2do ed, prensa fría del laboratorio del puerto del resorte.
2. Brown, T.A. (1991). Biología molecular LabFax. Editores científicos del bíos limitados.
3. Anermuller, S.A. (1990). Visualización rápida de la DNA genomic y del ARN total en geles de la agarosa. Biotecnología 8 (1), 36-37.
4. Almeida, T.A., y otros (2000). Talla-fraccionamiento del ARN por electroforesis caliente de la agarosa. BioTechniques 28 (3), 414-6.
5. Gerard, G. y Miller, K. (1997). Comparación de los geles del glioxal y del formaldehído para los rRNAs del apresto. Foco 19 (1), 17-8.
6. Pelle'R y otros (1993). Hibridación norteño: condiciones electroforéticas rápidas y simples. NAR 21 (11), 2783.