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protocolos del siRNA y protocolos de RNAi

protocolo de Transfection del siRNA

 protocolo del transfection del siRNA: Transfect 6 placas bien

1. aplique el primer tratamiento del siRNA cuando las células son los 60% confluentes (confluency de la medida con el voltímetro); platee las células 1.5x10^6 el viernes, transfect el miércoles. Para cada uno receptor de papel:

1. Diluya el siRNA de 2.5 ug (los 20uM es aproximadamente 0.26ug/ul. UL 9.62 por bien de una placa 6-well) con medios de cultivo a un volumen final de UL 100. Extremidadesde la pipeta de la barrera del SE de U. Usted puede hacer una mezcla principal si son todos los receptores de papel transfected con el mismo siRNA. Haga esto en un tubo plástico esterilizado estéril.
2. Agregue 12 UL RNAiFect (Qiagen - o cualquier otro reactivo del transfection del RNA, ve el protocolo del fabricante) por el tubo del mastermix del siRNA y mézclese suavemente.
3. Incube por 15 minutos en la temperatura ambiente para permitir la formación compleja entre el siRNA y los lípidos.
4. Aspire los media de las células y agregue los media frescos 900ul a cada uno bien.
5. Agregue la mezcla del siRNA (UL 112 por receptor de papel) gota a gota mientras que placa suavemente que remolina.
• Aplique el segundo tratamiento del siRNA 2 días más adelante, después de los pasos de progresión contorneados arriba. El segundo transfection agregará a la expresión de la disminución del gene del interés.

Otros protocolos del siRNA

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