Electroforesis del gel de SDS-PAGE

¿Definición de SDS-PAGE?

SDS-PAGE es una técnica de la biología molecular usada para separar las proteínas por consiguiente por talla. SDS-PAGE también puede separar las moléculas de la DNA y del ARN.

Papel del SDS en electroforesis del gel de SDS-PAGE

SDS-PAGE, electroforesis del gel de poliacrilamida del sulfato dodecyl de sodio, es una técnica usada en bioquímica, genética y biología molecular para separar las proteínas según su movilidad electroforética (una función de la longitud del encadenamiento del polipéptido o del peso molecular así como un plegamiento de proteína más alto de la orden, modificaciones del posttranslational y otros factores).

La electroforesis separa las moléculas según su carga: Relación de transformación total

 La electroforesis es una técnica para separarse, o las moléculas de resolución en una mezcla bajo influencia de un campo eléctrico aplicado, también llamada movilidad electroforética.  Las moléculas disueltas en un movimiento del campo eléctrico, o emigran a una velocidad determinada por su carga: relación de transformación total.  Por ejemplo si dos tienen la misma masa y forman, la que está con la mayor carga neta se moverá más rápidamente hacia un electrodo.  La separación de pequeñas moléculas, tales como aminoácidos y nucleótidos, es una de las muchas aplicaciones de la electroforesis.  En este caso, una pequeña gota de la muestra se deposita en una tira del papel de filtro o del otro substrato poroso, que se remoja con una solución que conduce.  Cuando un campo eléctrico se aplica como los extremos de la tira, las pequeñas moléculas disolvieron en el movimiento de la solución que conducía a lo largo de la tira a una tarifa que correspondía a su magnitud de su carga.

Talla del poro de la electroforesis del gel de la SDS-Poliacrilamida

Porque muchas proteínas o ácidos nucléicos que diferencian de tamaño y dimensión de una variable tienen casi idéntico cargar: las relaciones de transformación totales, electroforesis de estas macromoléculas en la solución dan lugar a poco o nada de separación de moléculas de diversas longitudes.  Sin embargo, la separación acertada de proteínas y de ácidos nucléicos se puede lograr por la electroforesis en los varios geles (suspensiones semisólidas en agua) algo que en una solución líquida.  La separación electroforética de proteínas se realiza lo más comúnmente posible en geles de poliacrilamida.  Estos geles son echados entre un par de placas de cristal polimerizando una solución de los monómeros de la acrilamida en polyacrylamidechains y simultáneamente cross-linking los encadenamientos en una matriz semisólida.  La talla del poro de un gel puede ser variada ajustando la concentración de poliacrilamida y del reactivo de reticulación.

Cuando una mezcla de proteínas se aplica a un gel y a una corriente eléctrica aplicados, proteínas más pequeñas emigran más rápidamente proteínas que más grandes a través del gel.  El índice de movimiento es influenciado por la talla del poro del gel y la fuerza del campo eléctrico.  Los poros en un gel de poliacrilamida altamente reticulado son absolutamente pequeños.  Tal gel podría resolver las pequeños proteínas y péptidos, pero las proteínas grandes no podrían moverse a través de él.

Procedimiento de SDS-PAGE

Según lo mencionado, las proteínas se mezclan con el SDS un detergente aniónico que los lazos a las proteínas y desnaturalicen su estructura terciaria conectada – secundaria y no del – del disulfuro con la adición de calor. El SDS también aplica una carga eléctrica negativa uniforme a cada proteína en proporción con su Massachusetts.

Si el SDS no fuera utilizado en la separación, las proteínas con pesos moleculares similares emigrarían diferentemente en el gel debido a las diferencias en su masa a las relaciones de transformación de carga. Pues las proteínas se separan usando corriente eléctrica y pore la talla de la matriz del gel, las diferencias en cargas (además de masa) desempeñarían un papel en la separación.

Seguimiento del tinte para SDS-PAGE

Un tinte de seguimiento se puede agregar a la solución de la proteína para permitir que el experimentador siga el progreso de la solución de la proteína a través del gel durante el funcionamiento electroforético.

Protocolos de SDS-PAGE