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Los geles del ARN se han utilizado por décadas para separarse hacia fuera y para evaluar cualitativo la calidad del ARN aislada de muestras. Si usted no está seguro qué ARN es comprobación:
¡El AUDIO
escucha una explicación detallada del ARN! y vea nuestro artículo de la enciclopedia del ARN.
Después del aislamiento de las muestras del ARN, la calidad de la preparación aislada del ARN es evaluada generalmente por la electroforesis en un gel de desnaturalización de la agarosa. Aunque los resultados sean principalmente cualitativos, usted puede conseguir una cierta información sobre la producción del ARN también.
Desnaturalizando los geles se utilizan porque el ARN tiende a plegable sobre sí mismo y a formar la estructura secundaria extensa y estable vía emparejar bajo intramolecular. Esta estructura secundaria del ARN evita que emigre principalmente según su talla.
Cerciórese de que usted incluya un control positivo del ARN en el gel, en caso de que usted consiga resultados inusuales usted puede entonces determinar si el problema era con el gel o era un problema con el ARN que usted está analizando. Usted puede también utilizar las etiquetas de plástico del peso molecular del ARN, una muestra del ARN sabida para estar intacto, o ambos, se pueden utilizar con este fin.
Los geles del ARN se visualizan con el bromuro de etidio que mancha mientras que el bromuro de etidio intercala entre la estructura secundaria de las moléculas del ARN y permite que el ARN sea visto bajo luz UV.
El ARN es separado hacia fuera por la electroforesis del gel (generalmente electroforesis del gel de la agarosa). Después de funcionar con un gel del ARN usted puede conducir una mancha blanca /negra norteña con transferencia subsecuente a la membrana, al hibridación con la punta de prueba, y finalmente a la detección. O simplemente (y mucho más rápido), mancha para el ARN usando el bromuro de etidio o SYBR (o tinte similar - mejor como él es no tóxico y más seguro).
Pues las manchas blancas /negras norteñas son mucho más aburridas de terminar que los geles del ARN y la polimerización en cadena en tiempo real, no se utilizan tanto como los geles del ARN.
La electroforesis del gel del ARN y sus variaciones se utilizan en la investigación de la biología molecular:
Las desventajas de usar electroforesis del gel del ARN incluyen:
Las ventajas de los geles del ARN incluyen:
Para verificar la integridad de su ARN usted debe hacer un análisis de la “mancha blanca /negra norteña”. Para lograr esto usted debe funcionar con un gel de desnaturalización.
Para los Mini-geles a los Midi-geles del uso del ARN: Haga 50 mL-100mL
Para los Mega-geles haga 400 ml.
Para el gel 100mL (funcionado con lo más comúnmente posible) usted necesita agregar 1g de la agarosa para hacer la solución de la agarosa del 1%.
| Para prepararse: | 500mls | 750 mls | 1.5 litros |
almacenador intermediario de 1X E (50X) - abajo |
10 ml | 15 ml | 30 ml |
| formaldehído de los 0.66M (1/19 del vol.) | 26.3 ml | 39.5 ml | 79 ml |
Agregue el siguiente:
Agregue:
Funcione con siempre un gel de la agarosa de su ARN para evaluar la calidad. No sólo confían solamente los resultados ULTRAVIOLETA de la espectrofotometría.
* Utilice el agua tratada DEPC y la cristalería cocida al horno para todos los pasos de progresión. Los almacenadores intermediarios deben ser ARNasa libremente o utilizar el agua purificada Milipore si usted está en una acometida. ¡La ARNasa está por todas partes! Desgaste los guantes, la cristalería cocida al horno del uso solamente, o el plástico virginal. Convite de DePC su agua, almacenadores intermediarios (excepto Tris). Tenga muy cuidado.
Si usted tiene actualmente un método preferido para funcionar con el ARN, continúe utilizándolo.
Discuta y los problemas o las preguntas del poste sobre los geles del ARN en el foro de los protocolos del ARN.
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