¡Recepción a la estación molecular!

Usted tiene que colocarse antes de que usted pueda fijar en nuestros foros o utilizar nuestras características avanzadas. ¡Registro Ahora! ¡Su libre y rápido!

¿Colocado ya? Conexión ahora abajo.

Nombre Del Utilizador:

Palabra de paso:

¿Recuérdeme?

¿Colocado ya y se olvidó de su palabra de paso? Tecleo abajo para recuperarla.

Recupere La Palabra de paso Perdida

¡Ahora ensamble - está rápida y libre!

¡La estación molecular es la red más grande de investigadores, de científicos y de amantes de la ciencia dondequiera!

Postes Recientes Del Foro

Sitio Del Bookmark Del Bookmark

PCR En tiempo real

PCR en tiempo real y cuantitativo

Introducción a PCR en tiempo real

PCR en tiempo real es un tipo de PCR cuantitativo que mida la cantidad de DNA o de mRNA en una muestra, de una población de células (cultura del tejido fino o de célula), o iguala recientemente de una célula. El tiempo real se utiliza comúnmente para determinar la expresión del mRNA de un gene, y su expresión nivela (número de la copia del mRNA) durante ciertas condiciones (tales como tratar las células con una droga).  PCR en tiempo real se puede utilizar para comparar muestras normales (del control) a las muestras de la enfermedad, dando una idea en cuanto a los cambios de la expresión que ocurren con patogenesia.  PCR en tiempo real debido a su sensibilidad también se utiliza en la detección de patógeno en la sangre tal como virus.

El desarrollo de PCR cuantitativo en tiempo real ha eliminado la variabilidad asociada tradicionalmente a PCR cuantitativo, así el permitir
cuantificación rutinaria y confiable de los productos de PCR.

Índice

Introducción a PCR en tiempo real

PCR En tiempo real: Ventajas de PCR en tiempo real

Historia de PCR en tiempo real

Sistemas en tiempo real de PCR disponibles

Protocolos En tiempo real de PCR

Mecanismo de PCR en tiempo real

PCR En tiempo real: Ventajas de PCR en tiempo real

Cada tipo expressess de la célula un conjunto de moléculas del mRNA, conocido como transcriptome.  En respuesta a estímulos, las células pueden para arriba-regular o abajo-regular factores tales como enzimas de la proteína dentro de la célula regulando los niveles del mRNA de estos factores.  los niveles del mRNA no se correlacionan siempre con los niveles de la proteína así que una cierta precaución es necesaria, no obstante los niveles del mRNA corresponden generalmente libremente a los niveles de la proteína.  Medir los niveles del mRNA de ciertos factores dentro de una célula que usa el pcr en tiempo real es un método que dará pistas en cuanto a las cantidades de estos factores o proteínas.

Tradicionalmente, los niveles del mRNA dentro de la célula fueron medidos usando borrar norteño.  Esta técnica se mira como oro-esta'ndar en la medida de los niveles del gene expression/mRNA mientras que utiliza la punta de prueba radiactiva para etiquetar el RNA, que entonces se cuantifica usando un centelleo contrario dando lecturas muy exactas. El borrar norteño aunque muy es exacto tenía varias desventajas incluyendo el uso de la radiactividad. El borrar norteño requirió la medida exacta del mRNA y el RNA total de las células extrajo para comparar muestras. Esto era un problema porque aunque los métodos de detección eran muy exactos, el error se podría introducir en borrar norteño (o el RNA dot/slot que borra) con diferencias en niveles totales de RNA/mRNA entre las muestras (tratamientos de la célula del IE, diversos tejidos finos, diversos animales, etc.).  También requirió las cantidades relativamente grandes de RNA que requirieron una gran cantidad de células. Recientemente, la cuantificación del gene del mRNA o los métodos en tiempo real del pcr se ha mejorado y es más fáciles de realizarse y no requiere el uso de la radiactividad.  Los investigadores tienen a menudo solamente acceso a las cantidades pequeñas de células especialmente en los campos de la investigación de la célula de vástago y de la investigación de la célula primaria, y el pcr en tiempo real ha permitido cuantificar niveles del mRNA de uniforme muy una pequeña cantidad de células y últimamente incluso células.  Sin embargo, esta sensibilidad extrema de los métodos en tiempo real del pcr hace vital proteger sus muestras contra la contaminación, que conduciría a los resultados falsos. Los métodos y los sistemas en tiempo real actuales del pcr también no requieren la medida de las concentraciones del mRNA o de la muestra de la DNA antes de que se conduzca el pcr en tiempo real.

Historia de PCR en tiempo real

Higuchi et al.1,2 iniciaron el análisis de la cinética de PCR construyendo un sistema que detecta productos de PCR como
acumulan. Este “sistema” en tiempo real incluye el bromuro de ethidium del intercalator en cada reacción de la amplificación,
un cycler termal adaptado para irradiar las muestras con la luz ultravioleta, y detección de la fluorescencia que resulta
con una cámara fotográfica refrescada controlada por ordenador del CCD. La amplificación produce cantidades de aumento de double-stranded
DNA, que ata el bromuro de ethidium, dando por resultado un aumento en fluorescencia. Trazando el aumento en fluorescencia
contra número del ciclo, el sistema produce los diagramas de la amplificación que proporcionan a un cuadro más completo del
PCR procesan que la acumulación de prueba del producto después de un número fijo de ciclos.

Sitios externos: ¡vea PCR en tiempo real en PCR en tiempo real Info!

Referencias para PCR en tiempo real

1. Higuchi, R., Dollinger, G., Walsh, S. del P., y Griffith, R. 1992. Amplificación y detección simultáneas de las secuencias específicas de la DNA.
Biotecnología 10:413–417.

2. Higuchi, R., Fockler, C., Dollinger, G., y Watson, R. 1993. PCR Cinético: El vigilar en tiempo real de las reacciones de la amplificación de la DNA.
Biotecnología 11:1026–1030.

Protocolos En tiempo real de PCR	PCR en tiempo real Bioinformatics y bases de datos	Aprenda sobre PCR en tiempo real	Kits en tiempo real y productos de PCR	Foro En tiempo real de PCR	Libros En tiempo real de PCR