Protocolos Estables De Transfection

El AfCS está utilizando tecnología del antisense para manipular señalar la expresión de la proteína en los 264.7 SIN PROCESAR macro'fago-como línea de la célula. Esto se puede alcanzar por el transfection de los oligonucleotides gene-especi'ficos del antisense (ASOs). El procedimiento siguiente implica el transfection de ASOs en las 264.7 células SIN PROCESAR usando el reactivo del transfection de FuGENE 6. Posteriormente, el RNA o la proteína total aislado de éstos transfected las células se puede utilizar evaluar el nivel de la precipitación del mRNA o de la proteína, respectivamente. - [oligonucleotide leído Transfection de Antisense de 264.7 células SIN PROCESAR con FuGENE 6 en un plato 24-Well]

Los campos eléctricos pulsados se pueden utilizar para introducir la DNA en una variedad amplia de células animales. Electroporation trabaja bien con las líneas de la célula que son refractivas a otras técnicas, tales como coprecipitation de fosfato-DNA del calcio. Pero, como con otros métodos del transfection, las condiciones óptimas para electroporating la DNA en líneas no comprobadas de la célula se deben determinar experimental. - [DNA leída Transfection de Electroporation]

Las células de CHO Lec3.2.8.1 tienen 4 mutaciones independientes en los caminos del glycosylation de N y de O. Cuando estaban cultivadas con el inhibidor del alfa-alpha-glucosidase I N-buti'lico-deoxynojirimycin, las glicoproteínas produjeron en células de CHO Lec3.2.8.1 son totalmente susceptibles a la digestión de Endo H. Endo H hiende el chitobiose, dejando un solo N-acetylglucosamine N-conectado por el sitio que es ideal para el mantenimiento de la solubilidad de proteína y de las interacciones especiales de la carb-protei'na, por ejemplo entre el primer residuo y tryp del glucosamine del N-acetilo. - [establecimiento leído de Transfectant estable del protocolo de las células de CHO Lec]

Transfected estable las células, generadas en las primeras dos etapas del procedimiento, se inducen para la expresión del gene de la blanco. Después de cosechar y de lysis, los lysates son analizados SDS-PAGE e immunoblotting. - [tetracycline leído como regulador de la expresión inducible III del gene]

El protocolo utiliza un sistema autoregulatory en el cual el tTA del transporte-activador del transcriptional conduzca su propia expresión y la de un gene de la blanco. La primera etapa del procedimiento describe cómo generar líneas estables de las células NIH-3T3 que expresan tTA solamente o tTA y el gene tetracycline-regulado de la blanco. - [tetracycline leído como regulador del protocolo inducible de la expresión del gene]

Esta etapa del procedimiento describe el transfection con los genes de la blanco de las líneas de la célula que expresan ya tTA inducible. En este ejemplo, los genes de la blanco están transfected en un plasmid que lleve resistencia del puromycin como etiqueta de plástico seleccionable. - [tetracycline leído como regulador del protocolo inducible II de la expresión del gene]