Protocolos de la transfección del fosfato de calcio

Este método de la transfección del fosfato de calcio trabaja mejor en las variedades de células que son 1) transformado altamente y 2) el adherente (Hela, U2OS, SAOS2, AdAH, NPC-KT y obtienen a partir la eficacia la 20% a 100% de la transfección dependiendo de la variedad de células). Los trabajos bien para los experimentos transitorios pero las precauciones se deben utilizar en el diseño y la interpretación de los experimentos basados en la discusión abajo. También trabaja muy bien para generar variedades de células estables. Este método es absolutamente sensible a la cantidad de plásmido de la entrada de información. - [Método leído de la transfección del fosfato de calcio]

Este protocolo, se basa en el método venerable de Graham y de van der Eb (1973). El procedimiento se utiliza principalmente para generar líneas estables de células que llevan cromosómico copias integradas de la DNA transfected. - [Transfección Calcio-fosfato-mediada leída de células con la DNA de peso molecular elevado de Genomic]

El fosfato de calcio forma un precipitado insoluble con la DNA, que asocia a la superficie de la célula y es tomada en las células por endocytosis. El protocolo se adapta fácilmente para el uso con otros tipos de células, adherentes y nonadherent. Este protocolo es una versión modificada de un método publicado por Jordania y otros (1996) quién los métodos calcio-fosfato-basados riguroso optimizados de la transfección para las células chinas del ovario del hámster y la línea 293 de células embrionarias humanas del riñón. - [Transfección Calcio-fosfato-mediada leída de células eucarióticas con el plásmido DNAs]

Este protocolo describe dos métodos de la transfección para expresar la actinia GFP-marcada con etiqueta en neuronas primarias. El método el reactivo DOTAP (diagnósticos del lípido de Roche) produce la actinia-GFP-expresión de las neuronas hippocampal que sobreviven bien durante largos periodos en cultura. El método del fosfato de calcio se puede utilizar a las neuronas del transfect que han estado creciendo ya en tiras in vitro. Las células de Transfected convenientes para la proyección de imagen se pueden obtener en culturas hasta 15 días in vitro. - [Neuronas cultivadas Transfecting leídas de Hippocampal con un plásmido de la Actinia-GFP]

Este protocolo describe la transfección de la DNA del plásmido en las neuronas hippocampal primarias usando el coprecipitation de DNA/calcium-phosphate (CaPO4). El pH exacto del media de la transfección y la época de la incubación de células con el coprecipitado son críticos para la transfección reproductiva y eficiente. Una vez que estos parámetros se optimizan para un plásmido dado, el método se adapta fácilmente para la transfección de otras variedades de células establecidas. - [Transfección leída de las neuronas de Hippocampal con la DNA del plásmido usando el fosfato de calcio Coprecipitation]