construya los protocolos

Categoría: Protocolos virales de la manipulación: Protocolos bacteriófagos de la manipulación M13

El protocolo describe tres métodos estándar para construir recombinants del bacteriófago M13: (1) ligadura de la DNA del separador de millares a un vector linearizado, preparado por la hendidura de M13 RF con una sola enzima de la restricción; (2) usando la fosfatasa alcalina para suprimir la uno mismo-ligadura del vector linearizado, y (3) usando M13 RF hendido con dos enzimas de la restricción para la reproducción direccional. - [La reproducción leída en el bacteriófago M13 Vectors protocolo]

Categoría: Protocolos de la DNA: Protocolos de la biblioteca de la DNA de Genomic

Esta etapa resume cómo construir una biblioteca del cDNA en un vector mamífero, usando kits comerciales. Estos kits están disponibles de varios fabricantes e incluyen generalmente todos los reactivo requeridos. - [Construcción leída de las bibliotecas del cDNA en los vectores eucarióticos de la expresión para la construcción y la investigación]

Categoría: Protocolos de la DNA: Protocolos de la biblioteca del cósmido

El protocolo describe cómo construir una biblioteca de los fragmentos 35-45-kb de la DNA genomic en el vector doble del cósmido del sitio de lechuga romana, SuperCos-1. Los pasos de progresión incluyen: Linearización y defosforilización de la DNA SuperCos-1; Digestión parcial de la DNA de peso molecular elevado con MboI; Defosforilización de la DNA genomic de peso molecular elevado; Ligadura de los brazos del cósmido a la DNA genomic: Empaquetando y plateando recombinants; Aislamiento y análisis de cósmidos recombinantes: Validación de la biblioteca. - [La construcción leída de las bibliotecas de la DNA de Genomic en cósmido Vectors protocolo]

Categoría: Protocolos del ratón: Protocolos de la genética del ratón

El protocolo describe un método para electroporating la DNA en las células del ES, así como métodos de la selección. Los estudios piloto se deben realizar para optimizar las condiciones para cada construcción de la DNA. El método de la selección descrito aquí es uno del más compleja. Implica el apuntar de las construcciones en las cuales el gene bacteriano de la neomicina-resistencia interrumpe la secuencia de codificación del gene del ratón. - [DNA leída de Electroporating en las células del vástago (ES) y protocolo embrionarios de los métodos de la selección]

Categoría: Biología de célula y cultivo celular: Biología y cultura de célula de vástago del ES

Cultivo celular del ES/del MEF y electroporación de apuntar la construcción. Gary Brown - [cultivo celular leída del ES/del MEF y electroporación de apuntar la construcción]

Categoría: Biología de célula y cultivo celular: Biología y cultura de célula de vástago del ES: Fibroblastos embrionarios del ratón de los protocolos del MEF

El Dr. Gary Brown. Electroporación y transfección de las células del ES/del MEF usando la electroporación para una construcción de alcance. - [Cultivo celular leída del ES/del MEF y electroporación de apuntar la construcción]

Categoría: Protocolos de la célula de vástago: Protocolos del cultivo celular de vástago

Protocolo para el cultivo celular de ES/MEF y la electroporación de apuntar la construcción. - [Cultivo celular leída del ES/del MEF y electroporación de apuntar protocolo de la construcción]

Categoría: Protocolos de la célula de vástago: Protocolos embrionarios de los fibroblastos del ratón

Protocolo para el cultivo celular de ES/MEF y la electroporación de apuntar la construcción. - [Cultivo celular leída del ES/del MEF y electroporación de apuntar protocolo de la construcción]

Categoría: Protocolos del aislamiento y de la cultura de la célula primaria: Protocolos mamíferos del cultivo celular

Protocolo para cultivo celular del ES/del MEF y electroporación de apuntar la construcción. - [Cultivo celular leída del ES/del MEF y electroporación de apuntar protocolo de la construcción]

Categoría: Protocolos del ratón: Protocolos del cultivo celular del ratón

Protocolo para cultivo celular del ES/del MEF y electroporación de apuntar la construcción. - [Cultivo celular leída del ES/del MEF y electroporación de apuntar protocolo de la construcción]

Categoría: Protocolos de la DNA: Protocolos de la biblioteca de la DNA de Genomic

El protocolo describe cómo construir y amplificar una biblioteca genomic de la DNA en un vector del plásmido (pSPL3) equipado para expresar exones reproducidos en células mamíferas transfected. - [Interceptación y amplificación leídas del exón para la construcción del protocolo de la biblioteca]

Categoría: Protocolos del citoesqueleto: Protocolos de la miosina de la actinia

La misma construcción GFP-marcada con etiqueta de la actinia usada en experimentos de la transfección de la célula se ha utilizado para producir ratones transgénicos. Los animales transgénicos permiten la proyección de imagen del tejido de cerebro en el animal intacto, como rebanadas agudo cortadas o como culturas organotypic de la rebanada. También sirven como fuente de células para las neuronas de la proyección de imagen en la alta resolución en cultivo celular de baja densidad disperso. En contraste con las células transfected en la cultura, adonde el nivel de expresión de la actinia-GFP en neuronas varía considerablemente, ratones transgénicos… - [Actinia leída de la proyección de imagen en rebanadas del tejido del protocolo transgénico del cerebro del ratón]

Categoría: Protocolos virales de la manipulación: Protocolos bacteriófagos de la manipulación M13

El protocolo usado principalmente para generar la acción grande de la DNA double-stranded de tensiones de M13 que se utilicen rutinario como reproducción vectors. Las granes cantidades de DNA de una sola fila de un recombinante individual pueden de vez en cuando ser necesarias para los propósitos específicos, e.g., de generar muchas preparaciones de una punta de prueba radiactiva determinada o de construir una gran cantidad de mutantes sitio-dirigidos. - [Preparación en grande leída del protocolo de una sola fila y Double-stranded de la DNA del bacteriófago M13]

Categoría: Protocolos de la purificación del ácido nucléico: Protocolos del aislamiento de la DNA: Protocolos del aislamiento de la DNA de Genomic

El protocolo se utiliza para establecer las condiciones para la digestión de la enzima de la restricción de la DNA genomic eucariótica que generará fragmentos de una talla apropiada para la construcción de bibliotecas genomic.  Para construir una biblioteca genomic, la longitud media de la DNA genomic que comienza debe ser por lo menos ocho veces la capacidad del vector. - [Digestión parcial leída de la DNA eucariótica para el uso en las bibliotecas de Genomic: Protocolo experimental de las reacciones]

Categoría: Protocolos de la biología de la planta: Protocolos de la genética de Arabidopsis

Protocolo para la ingeniería de precisión de los lugares geométricos del gene de la planta por la reproducción homóloga de la recombinación en Escherichia Coli. Incluye: Pasos de progresión dominantes en el rescate del lugar geométrico de EL250 RED-HR y el procedimiento de la ingeniería; Construcciones del diseño y del plásmido de la cartilla; Construcción de la boquete-reparación de AtSTM; Alcance de la espina dorsal de la construcción; Preparación de las células electrocompetent EL250; Transformación de CCB F24o1 e inducción de la función recombinogenic en EL250; Rescate del lugar geométrico de AtSTM de CCB F24o1 de boquete-reparación HR. - [ingeniería de precisión leída de los lugares geométricos del gene de la planta por la reproducción homóloga de la recombinación en Escherichia Coli]

Categoría: Protocolos de la levadura: Protocolos de los sistemas del Dos-Híbrido de la levadura

El protocolo describe cómo generar una construcción del plásmido (pBAIT) que exprese una proteína de la blanco fundida a la proteína bacteriana de LexA. PBAIT cotransformed en la levadura con un plásmido del reportero del lexAop-lacZ que lleva el gene bacteriano del lacZ bajo control del operador del lexA. La tensión receptora de la levadura contiene un gene cromosómico integrado del reportero leu2, también bajo control del operador del lexA. - [Etapa leída 1 de los sistemas del Dos-híbrido: Caracterización de un protocolo de la proteína de la fusión del Cebo-LexA]