Protocolos aviares del pájaro

El protocolo describe cómo disecar las médulas espinales de los embriones aviares dsRNA-tratados para el análisis de la dirección commissural del axón. Después de la fijación de la médula espinal con paraformaldehido, los axones commissural se manchan con Rápido-DiI. - [Disección leída de las médulas espinales para el análisis de Pathfinding Axonal en embriones aviares dsRNA-Tratados]

El protocolo describe un método para en la transfección del ovo de embriones aviares con el ARN double-stranded (dsRNA). El dsRNA se inyecta en la médula espinal del embrión. La electroporación subsecuente facilita la absorción celular de las moléculas del dsRNA. - [Inyección leída del dsRNA y electroporación en protocolo aviar de los embriones]

El protocolo describe la producción de ARN double-stranded (dsRNA) de fragmentos de cDNAs de los genes del candidato. Los fragmentos del cDNA se deben reproducir en plásmidos con un promotor que flanquea SP6 y T7 (e.g., pSP72 o pCRII). Se lineariza el plásmido y el sentido y RNAs antisentido son producidos por separado por la transcripción in vitro. Después de la purificación, los hilos del ARN se destemplan para rendir una molécula del dsRNA conveniente para RNAi en embriones aviares. - [Producción leída de dsRNA para RNAi en protocolo aviar de los embriones]

El protocolo describe un método para manchar fibras de nervio en las rebanadas del tejido de embriones aviares usando un anticuerpo contra la subunidad 160-kD de neurofilaments. Esto permite la comparación del modelo de ramificación del motor y de neuronas sensoriales entre el control y los embriones experimentales. El tejido es adentro cortadas rebanadas usando una máquina de cortar del vibratome o del tejido. El protocolo es conveniente para embriones más viejos después aproximadamente de la etapa 33 y las regiones por las cuales no sea accesible entero-montan análisis. - [Coloración leída de las rebanadas del tejido para el análisis de Pathfinding Axonal en protocolo aviar dsRNA-Tratado de los embriones]

El protocolo describe un método para manchar fibras de nervio en entero-monta las preparaciones de embriones aviares usando un anticuerpo contra la subunidad 160-kD de neurofilaments. Esto permite la comparación del modelo de ramificación del motor y de neuronas sensoriales entre el control y los embriones experimentales. Este protocolo se ha solicitado con éxito embriones en diversas etapas hasta sobre la etapa 33 (7 días de incubación). - [Leído Entero-Monte las preparaciones para el análisis de Pathfinding Axonal en protocolo aviar dsRNA-Tratado de los embriones]