Membranas occidentales de la mancha blanca /negra que eliminan

El eliminar de la membrana es el retiro de anticuerpos (primario y secundario incluyendo) de una membrana occidental de la mancha blanca /negra, permitir la incubación de los nuevos anticuerpos primarios y secundarios para el análisis de una nueva proteína por borrar occidental.

La electroforesis del gel de la agarosa se utiliza principalmente en análisis o la separación de moléculas de la DNA y del ARN (aunque las proteínas se pueden también separar en los geles de la agarosa), no obstante la separación también permite la purificación de tallas específicas de DNAs después de la digestión de la enzima de la restricción. Esto se utiliza generalmente en la clonación para obtener los plásmidos del corte, en los cuales la electroforesis del gel de la agarosa separa vectores del corte los sin cortar.

Así el eliminar permite:

1. La reutilización de las membranas occidentales de la mancha blanca /negra a probar para la expresión de otra proteína
2. Al análisis para la proteína total
3. Para probar para la proteína no-phosphorylated (después de probar para la proteína phosphorylated).

El eliminar requiere almacenadores intermediarios y la incubación especiales en un horno.

Los almacenadores intermediarios utilizaron:

Almacenador intermediario que elimina

• Tris-Ácido clorhídrico de 62.5 milímetros (pH 6.8)
• El 2% SDS. (agregue UL 280 del merceptoethanol beta 2 o de una concentración final de 0.1 M 2-Mecaptoethanol).

• agregue el μl 280 del beta-mercaptoetanol 2 por 40 ml de almacenador intermediario que elimina (a una concentración final de 100 milímetros)
• 1. Lave la membrana en TBST (1 x el minuto 5)
  2. Incube la membrana en el almacenador intermediario que elimina para el minuto 30 en 50-60°C (utilice un horno de la calefacción para esto - y guarde el debido cerrado puerta del horno oler)
  3. Lávese en TBST (2 x el minuto 5)
  4. Bloquee la membrana para 1 h en leche de bloqueo del 5%
  5. Siga el protocolo normal para desarrollar manchas blancas /negras occidentales.