¡Recepción a la estación molecular!

Usted tiene que colocarse antes de que usted pueda fijar en nuestros foros o utilizar nuestras características avanzadas. ¡Registro Ahora! ¡Su libre y rápido!

¿Colocado ya? Conexión ahora abajo.

Nombre Del Utilizador:

Palabra de paso:

¿Recuérdeme?

¿Colocado ya y se olvidó de su palabra de paso? Tecleo abajo para recuperarla.

Recupere La Palabra de paso Perdida

¡Ahora ensamble - está rápida y libre!

¡La estación molecular es la red más grande de investigadores, de científicos y de amantes de la ciencia dondequiera!

Postes Recientes Del Foro

 

Protocolos De la Proteína

Enciclopedia De la Proteína

Proteína Bioinformatics

Foro De la Ciencia De la Proteína

Proteína Blog

Noticias de la DNA

 

Determinación de la proteína por protocolo de la absorción de UV

Determinación de la proteína por el protocolo de la absorción de UV, (modificado del protocolo por Alastair Aitken y Michèle P. Learmonth)

Materiales para la concentración UV de la proteína

1. 0.1 M K2SO4 (pH 7.0).
2. almacenador intermediario de fosfato del potasio de 5 milímetros, pH 7.0.
3. Detergente no iónico (0.01% Brij 35)
4. Guanidinium-HCl.
5. filtro del millipore de los 0.2-µm (Watford, Reino Unido).
6. espectrómetro UV-visible: La lámpara del hidrógeno se debe seleccionar para la intensidad     máxima
en la longitud de onda determinada.
7. Cuvets, cuarzo, para < 215 nm.

Método UV De la Concentración De la Proteína

 Valoración de la proteína por la absorbencia Near UV (280 nm):

1. Un espectrofotómetro confiable es necesario. La solución de la proteína se debe diluir en
el almacenador intermediario a una concentración que esté en conformidad con el rango exacto del instrumento (véase las notas 1 y 2).

2. La solución de la proteína que se medirá puede estar en una amplia gama de almacenadores intermediarios, así que no es generalmente ningún problema para encontrar uno que sea apropiado para la proteína que puede ya estar en un almacenador intermediario determinado requerido para un paso de progresión o un análisis de la purificación para la actividad enzimática, por ejemplo (véase las notas 3 y 4).

3. Mida la absorbencia de la solución de la proteína en 280 nm, usando los cuvets del cuarzo o los cuvets que se saben para ser transparentes a esta longitud de onda, llenados de un volumen de la solución suficiente cubrir la abertura a través de la cual el rayo de luz pasa.

4. El valor obtenido dependerá de la longitud de camino del cuvet. Si no 1 centímetro, debe ser
ajustado por el factor apropiado. La ley de la Cerveza-Lambert indica eso: A (absorbencia) = ε c l donde ε = el coeficiente de la extinción, c = la concentración en el mol/L y l = longitud de camino óptica en el centímetro por lo tanto, si ε se sabe, medida de A da la concentración directamente, ε está
cotizado normalmente para una longitud de camino çenti'metro.

5. El valor real de la absorbencia UV para una proteína dada se debe determinar por un cierto método absoluto, e.g., calculado de la composición de aminoácido, que se puede determinar por análisis del aminoácido. La absorbencia UV para una proteína entonces se calcula según el fórmula siguiente: A280 (1 mg/mL) = (5690nw + 1280ny el + 120nc)/M
del donde están los números el nanovatio, ny, y el nc de los residuos de Trp, de Tyr, y de Cys en el polipéptido
la masa M y 5690, 1280 y 120 es los coeficientes respectivos de la extinción para estos residuos (véase la nota 5).

Vea también los protocolos de la concentración de la proteína de otros laboratorios.

Otros Artículos De la Proteína:

Mancha blanca /negra Occidental Casera

Inmunoprecipitación Casera

Electrophoresis Del Gel de SDS-PAGE

Separación De la Proteína

Purificación De la Proteína

Identificación De la Proteína

Sistemas Recombinant De la Expresión De la Proteína

Técnicas De la Expresión De la Proteína