Análisis de la proteína de Bradford

Determinación de la concentración de la proteína por el análisis de Bradford

Un procedimiento simple para la determinación de la concentración de la proteína en soluciones es el análisis de la proteína de Bradford que fue descrito primero por Bradford (Bradford y otros, 1976).

Una valoración de la concentración de la proteína es esencial ser hecho rápidamente y exactamente en muchos campos del estudio de la proteína. El análisis de Bradford se ha convertido en el método preferido para cuantificar la proteína en muchos laboratorios. Esta técnica es más simple, más rápidamente, y más sensible que el método de Lowry. Además, en comparación con el método de Lowry, está conforme a menos interferencia por los reactivo comunes y los componentes sin proteínas de muestras biológicas.

El análisis de Bradford confía en el atascamiento del tinte Coomassie G-250 azul a la proteína.

Los estudios detallados indican que el tinte libre puede existir en cuatro diversas formas iónicas para las cuales los valores del pKa sean 1.15, 1.82, y 12.4. De las tres formas cargadas del tinte que predominan en la solución ácida el reactivo del análisis, las formas rojas y verdes más catiónicas tenga máximos de la absorbencia en 470 nanómetro y 650 nanómetro, respectivamente. En cambio, la forma azul más aniónica del tinte, que ata a la proteína, tiene un máximo de la absorbencia en 590 nanómetro.

Así, la cantidad de proteína puede ser estimada determinando la cantidad de tinte en la forma iónica azul. Esto es alcanzada generalmente midiendo la absorbencia de la solución en 595 nanómetro.

El tinte aparece atar lo más fácilmente posible al arginyl y a los residuos lisiles de proteínas. Esta especificidad puede llevar a la variación en la respuesta del análisis a diversas proteínas, que es la desventaja principal del método. El análisis de Bradford de la original muestra la variación grande en respuesta entre diversas proteínas. Varias modificaciones al método se han desarrollado para superar este problema.

Sin embargo, estos cambios dan lugar generalmente a un análisis menos robusto que sea a menudo más susceptible a interferencia por otros productos químicos. Por lo tanto, el método original ideado por Bradford sigue siendo la formulación más conveniente y más ampliamente utilizada. Dos tipos de análisis se describen aquí: el análisis estándar, que es conveniente para medir entre el µg 10 y 100 de la proteína, y el microanálisis, que detecta entre el µg 1 y 10 de la proteína. Este último, aunque sea más sensible, es también interferencia más propensa de otros compuestos debido a la mayor cantidad de reactivo en relación con del tinte de la muestra en esta forma del análisis.

vea también: Protocolo del análisis de la proteína de Bradford

Referencias del método de Bradford

Bradford, anal. Bioquímica. 72:248, 1976.