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Tipos de proteína Microarray y de virutas del anticuerpo

Proteína y anticuerpo Microarrays

Virutas y anticuerpo Microarrays - diapositivas de cristal, Microwell/Nanowell de la proteína

            Dos formatos importantes de la viruta de la proteína ahora se utilizan, incluyendo las diapositivas de cristal y los nanowells (8.27).  debido a las cantidades grandes de métodos de la adherencia de la diapositiva solamente los tipos más comunes y más principales serán mencionados aquí.
            Es importante que las virutas de la proteína conservan las proteínas en un estado activo en las altas densidades, es compatible con la mayoría de los arrayers y de los exploradores comerciales, y puede ser impreso en tal manera que las proteínas permanecen en un ambiente humedecido (8.27). (Véase El Cuadro 2).

Virutas De la Diapositiva De cristal
Las diapositivas de cristal tienen la ventaja que son compatibles con el equipo microarray estándar y el equipo de la detección usados para las virutas de la DNA.  Son también baratas.  La mayoría de estudios ahora está utilizando las diapositivas de cristal.  Sin embargo, tienen una alta tarifa de la evaporación y son susceptibles a la contaminación cruzada posible (8.27). 
            Las primeras estrategias para la creación de las matrices de la proteína sobre el cristal fueron desarrolladas por Mirzabekov et el al..  Las matrices fueron producidas por las proteínas de inmovilización en los bolsillos minúsculos del gel que fueron asociados a la superficie de cristal.  Una variedad de immunoassays, la detección del antígeno, y los análisis enzimáticos fueron realizados.  debido a la estructura de la matriz 3D, inmovilización de la proteína era muy eficiente (28-30). 
En otro estudio, las proteínas fueron asociadas a una superficie de cristal activada con un agente de reticulación que reacciona con las aminas primarias (31).  Las proteínas fueron manchadas en una solución del glicerol del 40% que mantiene las proteínas un ambiente mojado y previene la deshidratación.  Para determinarse que sus microarrays de la proteína eran factibles para los análisis bioquímicos, probaron tres interacciones sabidas de la protei'na-protei'na, tres reacciones sabidas del kinase-substrato, y tres interacciones sabidas de la protei'na-ligand usando las proteínas fluorophore-marcadas con etiqueta, el ATP radiactivo, y los ligands sintetizados juntados a la albúmina fluorescently etiquetada del suero vacuno (BSA), respectivamente.  En la mayoría de los experimentos, una pequeña cantidad de proteínas fueron manchadas sin embargo en un experimento que identificaron un solo punto dentro de un arsenal de 10.000 puntos que contenían una otra proteína.  Este trabajo demostró el potencial de los microarrays de la proteína en análisis bioquímicos en grande sin embargo que su estudio analizaba un número muy pequeño de proteínas y las actividades de la novela no fueron identificadas.
Otro estudio utilizó las diapositivas de cristal para la detección de varios antígenos de la proteína.  Los analytes fueron manchados sobre una superficie de cristal tratada en la alta densidad usando un dispositivo mano-que manchaba o una robusteza microarray.  Los analytes manchados fueron detectados el usar de los anticuerpos asociados a una cartilla del oligonucleotide y a una reacción de la amplificación del círculo del balanceo.  La técnica tenía una alta sensibilidad, un rango dinámico ancho, y reproductibilidad excelente del punto-a-punto
(32).
La mayoría de los grupos ahora ponen en orden directamente las proteínas y los anticuerpos sobre las diapositivas de cristal llanas (31.33-35) y manchar se realizan en un ambiente humedad-controlado (8).

Virutas De Microwell/Nanowell
            Compatible con la alineación microarray y de la detección estándar del equipo sin embargo se requiere.  Este método es versatible para los análisis y las reacciones solucio'n-basados del mu'ltiple-componente.  Se reduce la evaporación y no hay contaminación cruzada.  También estas virutas son relativamente baratas (8.27).
Zhu et al., fabricados una estructura abierta, a saber nanowells en una superficie del polydimethylsiloxane (PDMS) utilizada por las diapositivas de cristal estándares (36). 
Estas virutas consisten en un arsenal de microwells en un elastomer disponible del silicón, poly(dimethylsiloxane) (PDMS) (37). Las matrices de Microwell permiten que los volúmenes pequeños de diversos analytes pila de discos denso en una sola viruta, con todo siguen segregadas físicamente durante el procesamiento por lotes subsecuente. Las proteínas covalente fueron asociadas a los receptores de papel usando un crosslinker 3-glycidoxypropyltrimethoxysilane (GPTS) (38).
Las moléculas capturadas se pueden recuperar fácilmente de los nanowells.  Cuando está cubierto con oro en los nanowells, se espera que los análisis de la resonancia del plasmon del spectrometry total y de la superficie del alto-rendimiento de procesamiento puedan ser realizados.  La desventaja más grande de esta técnica es que specialzed el equipo se requiere para cargar los nanowells en la alta densidad (8.27). 

Después: Métodos de la conexión de la proteína y del anticuerpo - creación de una viruta de Microarray

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Introducción y fondo a las virutas de la proteína y a las virutas del anticuerpo.

Referencias para la proteína y el anticuerpo Microarrays