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Moléculas de la captura del Microarray de la proteína y sus limitaciones

Virutas del Microarray de la proteína y del anticuerpo

Moléculas y sus limitaciones - virutas de la captura de la proteína

Moléculas de la captura y sus limitaciones
            La forma más común de matrices analíticas de la proteína es los microarrays del anticuerpo en los cuales los anticuerpos (o los imitadores del anticuerpo) los antígenos específicos de ese lazo se ponen en orden en una diapositiva de cristal en la alta densidad. Un lysate se pasa sobre el arsenal y el antígeno encuadernado se detecta después de lavarse. El desafío más grande con estos métodos está produciendo los reactivo que identifican la proteína del interés y con arriba bastante especificidad en una manera del alto-rendimiento de procesamiento.  Aunque los anticuerpos sean el reactivo tradicional de la opción para detectar las proteínas en mezclas complejas, los sueros policlonales no son a menudo específico y son costosos producir. También, el método convencional del hibridoma de producir los anticuerpos monoclonales altamente específicos es (8) desperdiciador de tiempo, laborioso y costoso.
           
Varios estudios usando los anticuerpos se han conducido recientemente a pesar de los obstáculos en la obtención de los anticuerpos específicos.  En uno de los estudios más grandes hasta la fecha, Sreekumar y otros manchó 146 anticuerpos distintos sobre el vidrio para vigilar las alternancias de la cantidad de la proteína en células del carcinoma de los dos puntos de LoVo. Sus resultados revelaron la para arriba-regulación inducida por radiación de muchas proteínas interesantes, incluyendo el factor 40 y 45, ligand factor-relacionado de p53, de la fragmentación de la DNA de la necrosis del tumor, así como las proteínas abajo-reguladas (58).

Hasta la fecha, la mayoría de los microarrays del anticuerpo fueron producidos con varios docena o unas centenas anticuerpos polivinílicos o monoclonales disponibles en el comercio.  Aunque los diez de millares de anticuerpos sean disponibles en el comercio, este número es escaso porque para la mayoría de las proteínas no hay anticuerpos disponibles.  El hecho de que muchos anticuerpos sean glycosylated y contengan las estructuras portantes a base de proteínas grandes significa que cruz-reaccionan a menudo con más de una proteína de la blanco.  Esto puede contribuir a una gran cantidad de positivos falsos (9).  Así otro problema ha estado obteniendo los anticuerpos de la alto-especificidad.    

            Uno del problema más grande con matrices del anticuerpo es especificidad. Las proteínas están a menudo presentes en un rango dinámico muy grande (106); así, los reactivo que pudieron tener alta afinidad para una proteína, pero son afinidad baja para otra todavía exhibirán la detección de la proteína más baja de la afinidad si es un (9) mucho más frecuente. Un grupo investigó la capacidad de 115 pares bien-caracterizados del anticuerpo-antígeno de reaccionar en microarrays de alta densidad en diapositivas de cristal modificadas. el 30% de los pares mostraron los lazos lineares previstos, indicando que una fracción de los anticuerpos era conveniente para el análisis cuantitativo (33). Muchos grupos han estado utilizando análisis del emparedado para evitar este problema.  Un análisis del emparedado es realizado manchando el primer anticuerpo en el arsenal y después detectando usar un segundo anticuerpo que reconozca una diversa parte de las proteínas. Este acercamiento aumenta dramáticamente la especificidad de la detección del antígeno, pero requerido que menos dos anticuerpos de alta calidad existen para que cada antígeno sea detectado (8).

Después: Microarrays del anticuerpo: Problemas y soluciones

Referencias para los Microarrays de la proteína y del anticuerpo

De nuevo a:

Introducción y fondo a las virutas de la proteína y a las virutas del anticuerpo.

Tipos de virutas del anticuerpo y de la proteína

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