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Conexión de la proteína a las virutas del Microarray

Microarrays de la proteína y del anticuerpo

Creación y fabricación de virutas del Microarray de la proteína y del anticuerpo

Conexión
            Para asociar las proteínas a una superficie sólida, la superficie del substrato tiene que ser modificada para alcanzar la capacidad de enlace máxima (8.27).  Las proteínas se asocian a la viruta en una capa de la conexión de la proteína (véase el cuadro 3).  Esta capa es típicamente una película orgánica que varía con la naturaleza de la aplicación.  Una variedad de materiales se han estudiado incluyendo la agarosa (39), el hidrogel dextrano-basado (40), los polímeros y los ácidos hidrofílicos del polyamino (41) del hidrogel poroso de la poliacrilamida.
            Un método conveniente de la conexión utilizó la nitrocelulosa-membrana o la polivinílico-L-Lisina cubrió el vidrio tales que las proteínas se podrían absorber pasivo sobre la superficie con las interacciones no específicas (34.42.43).  Las proteínas asociadas atan sobre la superficie en orientaciones al azar y se pueden lavar apagado bajo condiciones que se lavan rigurosas.  Sin embargo, el nivel de ruidos es generalmente más alto debido a la absorción/la adsorción no específicas. 
            Una conexión más específica y más fuerte es alcanzada creando superficies reactivas sobre el vidrio que puede covalente reticulación a las proteínas (31.36.26).  Un cross-linker bifuncional del silano se utiliza para formar una capa monomolecular uno mismo-ensamblada (SAM), que tiene un grupo funcional que reaccione con los grupos de hidróxido sobre el vidrio la superficie de cristal, y otro grupo que esté libre de reaccionar con los grupos primarios de la amina de proteínas o pueda ser más futuro químicamente modificado para alcanzar la especificidad máxima (44.45).  Otra variación es el vidrio gold-coated (46.47).  La ventaja de virutas gold-coated es que SPR y la espectrometría total se pueden integrar como métodos de detección para vigilar la dinámica de la reacción, e identificar las moléculas capturadas.
            Los acercamientos covalentes antedichos del cross-linking sin embargo tienen una desventaja. Debido al hecho de que los ligands reactivos también existan en las cadenas laterales de proteínas es posible que su conexión al azar puede alterar la confirmación nativa de proteínas, reducir la actividad de proteínas, o hacerlas inaccesibles a las puntas de prueba (8.27).
            Para orientar las proteínas uniformily lejos de la superficie de la viruta, las proteínas se pueden fundir con una etiqueta de la alto-afinidad en sus términos amino o del carboxy.  Con este método, las proteínas inmovilizadas/los anticuerpos son más probables permanecer en su conformación nativa, así no prohibiendo a los analitos el acceso eficiente a los sitios activos de las proteínas.  Este método era primer demostrado con éxito con la conexión de 5800 proteínas de la fusión que contenían una su etiqueta sobre una diapositiva de cristal níquel-revestida (26).  Otros métodos de la afinidad tales como glutathione/GST también se han utilizado (48).
Streptavidin basó métodos de la inmovilización también se ha empleado extensamente para asociar cualquier elemento biológico biotinylated a la superficie del arsenal (49).
            El material de ayuda de la viruta es porque las proteínas están altamente - sensible importante a las características fisioquímicas.  Por ejemplo, las matrices polares químicamente se tratan para atar a las proteínas hidrofílicas sin embargo que tales superficies son inadecuadas para las proteínas de la membrana celular (e.g. receptores juntados G-proteína) como poseen dominios hidrofóbicos (9). 
            Las proteínas no se comportan como los ácidos nucléicos, y diversas proteínas se comportarán en maneras diferentes cuando están expuestas a la misma química superficial.  Diversos tipos las químicas superficiales promoverán así la retención de algunas proteínas y causarán la desnaturalización o la pérdida de actividad de otras.  Por lo tanto, la opción apropiada de la química superficial es actividad importante como ésta permitirá que las proteínas inmovilizadas de tipos diversos conserven sus estructuras secundarias y terciarias, y así su biológica.  Se magnifica este problema cuando el número de diversos puntos en los aumentos de la viruta, como allí puede ser 100 maneras diferentes de inmovilizar 100 diversas proteínas para obtener el plegamiento y la función apropiados de todas las proteínas.  También un problema significativo está porque las funciones de la mayoría de las proteínas son actualmente desconocido, tan allí no es ninguÌ�n método a probar realmente si son todavía funcionales en la viruta (7).

Después: Métodos de la salida de la viruta de la proteína

Referencias para los Microarrays de la proteína y del anticuerpo

De nuevo a:

Introducción y fondo a las virutas de la proteína y a las virutas del anticuerpo.

Tipos de virutas del anticuerpo y de la proteína

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