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Proteína y anticuerpo Microarrays
Aplicaciones de las virutas de la proteína
1) Proteomics
Las tecnologías de la viruta de la proteína
proporcionarán a de gran alcance, a un alto-rendimiento de
procesamiento y a una herramienta versátil para el análisis de
genoma-scale de la función del gene (véase el cuadro 4). La actividad enzimática, las interacciones–de la proteína de la proteína y–del
nucleic-a'cido de la proteína, y las interacciones de la droga de la
pequeño-mole'cula se pueden todos analizar directamente en el nivel
de la proteína (77.78). Las matrices se pueden dirigir
para tratar la identificación de la proteína, la cuantificación, y
estudios de la afinidad. Un arsenal que perfila puede
cuantificar los niveles de proteínas específicas en una escala
global teniendo en cuenta una comparación de los estados normales
y de la enfermedad. Un arsenal de la afinidad puede
analizar las interacciones de peptides, las proteínas, los
oligonucleotides, las azúcares, los lípidos, o las moléculas y los
productos químicos pequeños con las proteínas inmovilizadas tales
como receptores, enzimas, o anticuerpos (8).
Actualmente, el paso de progresión tarifa-limitador es la
producción de una gran cantidad de proteínas. La capacidad de
automatizar la producción y las proteínas de la proteína fundidas a
las etiquetas de la alto-afinidad apresurará grandemente el
desarrollo de la protei'na-viruta. Las virutas de alta
densidad que contienen conjuntos grandes de proteínas o aún de
proteomes enteros permitirán el análisis del alto-rendimiento de
procesamiento de actividades bioquímicas, de interacciones–de la proteína de la proteína y de modificaciones
poste-de translacio'n, tales como phosphorylation, dephosphorylation,
methylation de la proteína, y ubiquitination.
La última meta del proteomics está a las actividades
bioquímicas del estudio de cada proteína codificada por un organismo
o un proteome. Un estudio de la señal conducido preparó
la primera viruta del proteome reproduciendo el ~94% (> 5800 de 6200)
de los bastidores abiertos de la lectura de la levadura en un vector
de la expresión de la levadura que expresó las proteínas como la
N-terminal GST-Su x6 dobla fusiones marcadas con etiqueta. Un método de la purificación de la proteína de la
levadura del alto-rendimiento de procesamiento fue desarrollado para
purificar individualmente las proteínas. los 80% de proteínas
de la levadura eran longitud completa y de la suficiente cantidad a
ser perceptible por la mayoría de los tipos del análisis. Las
proteínas entonces fueron purificadas usando las etiquetas de GST y
después asociadas a las diapositivas de cristal Ni-NTA-revestidas
usando las etiquetas HisX6. Además de identificar
interacciones sabidas, 33 proteínas obligatorias de la novela fueron
detectadas. 150 proteínas li'pido-que ataban de la
novela también fueron identificadas. Este estudio
demostró que un proteome entero se puede inmovilizar en una
superficie de cristal para defender directamente para las
interacciones con las proteínas y las moléculas pequeñas (26).
El acoplador de las virutas del masa-mass-spectrometry y
de la proteína tendrá aplicaciones amplias en identificar a
jugadores en interacciones–de la proteína de la
proteína, y también en el descubrimiento de la droga (80). Las proteínas y los ligands de la pequeño-mole'cula
limitan a las proteínas inmovilizadas en viruta se pueden identificar
usando el tiempo matriz-asistido del laser desorption/ionisation de la
espectroscopia total del vuelo (MADLI-TOF). Los formatos
de Microwell se satisfacen determinado para este propósito.
Así, las moléculas y las proteínas que atan específicamente
a muchas diversas proteínas pueden ser identificadas y esta
información se pueden utilizar para deducir redes y caminos
moleculares.
Una área que requerirá mejoras tecnológicas es el análisis
de las proteínas de la membrana. Una cantidad grande de
proteínas es probable ser membrana-limita, puesto que tanto pues un
tercio de todas las proteínas de la levadura es proteínas de la
membrana o las proteínas secretadas (81). debido al hecho de
que muchas de estas proteínas son activas cuando en membranas, por lo
tanto puede ser necesario purificarlas o reconstituir con los lípidos
asociados. Sin embargo, esto puede no ser tan difícil. Un
grupo podía inmovilizar biotinylated las membranas que contienen el
rhodopsin G-protei'na-juntado del receptor en una superficie de
cristal oro-revestida, y establece un análisis funcional para esa
proteína (82). Los procedimientos similares pueden
permitir analizar las proteínas de la membrana en un formato de la
viruta.
2) diagnóstico
Otra área que beneficiará de áreas de la
proteína es diagnóstico. El análisis altamente paralelo en
matrices permitirá la determinación de las etiquetas de plástico de
la enfermedad (e.g etiquetas de plástico del tumor) en extractos con
solamente un mínimo de material de la biopsia (muestra), creando las
nuevas posibilidades de vigilar el tratamiento y la terapia (83) de la
enfermedad (cáncer).
.
Después: Proteína Microarrays: Direcciones futuras y conclusiones
Referencias para la proteína y el anticuerpo Microarrays
De nuevo a:
Introducción y fondo a las virutas de la proteína y a las virutas del anticuerpo.
Tipos de virutas del anticuerpo y de la proteína
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