Extensión de la cartilla

Aprenda sobre la extensión de la cartilla.

La extensión de la cartilla aumenta la exactitud en la capacidad de asociar el extremo de una transcripción el ' final de los 5 al mismo nucleótido.

Cómo trabajos de extensión de la cartilla

1. Primero tenemos transcripción que ocurra generalmente naturalmente in vivo. Cosechamos simplemente el ARN celular que contiene la transcripción cuyos 5 ' termínenos quieren asociar. 
2. Entonces cruzamos un oligonucleótido por hibridación etiquetado (la cartilla) por lo menos de 12 nucleótidos al ARN celular.  Las cartillas por lo menos de 18 nucleótidos se utilizan generalmente de largo.  Para diseñar una cartilla que necesitamos saber la secuencia por lo menos de parte del ARN queremos asociar.  La especificidad de este método deriva de la complementariedad entre la cartilla y la transcripción, apenas pues la especificidad de asociar S1 viene de la complementariedad entre la punta de prueba y la transcripción.  En principio esta cartilla debe poder seleccionar la transcripción que queremos asociar de un mar del otro RNAs sin relación.
3. Entonces utilizamos transcriptase reverso para ampliar la cartilla del oligonucleótido el ' extremo a los 5 de la transcripción. El transcriptase reverso hace una copia de la DNA de un modelo del ARN.  Una vez que esta reacción de la extensión de la cartilla es completa, podemos desnaturalizar el híbrido de RNA-DNA y electrophorese la DNA etiquetada junto con etiquetas de plástico en un gel de alta resolución tal como los que está usados en la secuencia de la DNA.  Es conveniente utilizar la misma cartilla usada durante la extensión de la cartilla para hacer un conjunto de ordenar reacciones con los deoxynucleotides.  Entonces podemos utilizar los productos de estas reacciones de secuencia como etiquetas de plástico.

La extensión de la cartilla puede también darnos una estimación de la concentración de una transcripción dada.  Cuanto más alta es la concentración de nuestra transcripción, más las moléculas de la cartilla etiquetada cruzará por hibridación y por lo tanto etiquetadas las transcripciones reversas, más oscura es la venda en el autoradiograph del gel electroforético.

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