La polimerización en cadena basó mutagénesis dirigida sitio

Mutagénesis del sitio de la reacción en cadena de polimerasa

Aprenda sobre mutagénesis dirigida sitio basada polimerización en cadena.

(Refiera al diagrama abajo)

Comience primero con un plásmido que contiene un gene con un codón de la tirosina del TAC que queramos alterar a un codón de la fenilalanina de TTC. Para lograr esto que necesitamos cambiar EN los pares (azules) en la original a un par de TA. Este plásmido fue aislado de una tensión normal de Escherichia Coli que desnaturaliza en fecha secuencias de GATC. Indican a los grupos metílicos en amarillo. Los pasos de progresión siguientes se realizan para lograr esto:

Caliente el plásmido para separar sus hilos.
Entonces destemplamos las cartillas mutágenas que contienen el codón de TTC, o su complemento reverso, GAA. La base alterada en cada cartilla se indica en color de rosa.
Entonces realizamos algunos redondos de la polimerización en cadena (cerca de 8) con las cartillas mutágenas para amplificar el plásmido con el codón alterado. Utilizamos una polimerasa de DNA termoestable, tal como polimerasa de Pfu, para reducir al mínimo errores en el copiado del plásmido.
Entonces tratamos la DNA en la reacción de la polimerización en cadena con DpnI para digerir el salvaje-tipo desnaturalizado DNA. Puesto que el producto de la polimerización en cadena fue hecho in vitro, no se desnaturaliza y no se corta. Transformamos pasado las células de Escherichia Coli con la DNA tratada. En principio, solamente la DNA transformada sobrevive para transformar. Esto es controlada ordenando la DNA del plásmido de varias copias.

Mutagénesis dirigida sitio

Factores para una polimerización en cadena acertada

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La polimerización en cadena hola es que tan ..... Hice mi polimerización en cadena continuamente, y conseguí resultado favorable. pero ninguna de mi reacción de la polimerización en cadena está trabajando repentinamente…. no sé por qué…
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