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Polimerasas de PCR

Eligiendo la polimerasa derecha de la DNA es determinado por las punterías del experimento. Hay una cantidad extensa de anzymes comercialmente disponibles a elegir de ese diferencia en su processivity, estabilidad termal y fidelidad. La enzima más común usada es polimerasa de la DNA de Taq también conocida tan comercialmente como, polimerasa® de la DNA de AmpliTaq.

Polimerasa de la DNA De AmpliTaq

La polimerasa de la DNA de AmpliTaq es una enzima recombinant altamente caracterizada para PCR. Producido en E. coli del gene de la polimerasa de la DNA de Taq, así asegurando gran pureza. Se provee y se utiliza comúnmente como 5 uμL solución en glicerol protegido del 50% (v/v).

Properities Físico: La enzima es una proteína del kDa 94 con una actividad’de la polimerización’ 5 -3 que sea la más eficiente del rango–de 70° 80°C. Es increíblemente termoestable, con un período en 95°C de 35–40 minutos. En términos de completar un ciclo termal, el período es aproximadamente 100 ciclos. Los productos de PCR que usan esta enzima tendrán solas proyecciones bajas en los 3’ extremos de cada hilo polimerizado (esto se puede explotar para el uso con vectores de la reproducción de T/A).

Bio Reacciones: La polimerasa de la DNA requiere el ion del magnesio como cofactor y cataliza la reacción de la extensión de un modelo preparado en 72°C. Los cuatro dNTPs se utilizan para ampliar la cartilla y therby para copiar la secuencia de la blanco. Los nucleotides también modificados se pueden incorporar en productos de PCR.

Actividades: Esta enzima tiene a fork-como el dependiente de la estructura, polimerización realzada, actividad’del nuclease’ 5 -3. La actividad que posee la permite que el ti degrada las cartillas enes sentido descendiente e indicó que las blancos del circuka se deben linearizar antes de la amplificación. También esta actividad del nuclease se ha empleado en una técnica de señal-generacio'n fluorescente para la cuantificación de PCR. Esta enzima no tiene un exonuclease inherente’3’ -5 ni actividad el corregir, sino produce amplicons de la alta producción para la mayoría de las aplicaciones.

Polimerasa Del Oro De AmpliTaq

Esta enzima es una polimerasa químicamente modificada de la DNA de AmpliTaq, los mantienes reversibles de la modificación la enzima inactiva en la temperatura ambiente. El pH de alta temperatura y bajo promueve la revocación, restableciendo la actividad enzimática. Estas condiciones ocurren en un PCR Tris-protegido en 92°–95°C (el Tris-tris-Cl formulado a pH 8.3 en 25°C cae debajo de pH 7.0 90°C antedicho). El oro de AmpliTaq se formula para realizar igual que 5 uμL polimerasa de la DNA de AmpliTaq. Por lo tanto, un comienzo caliente se puede agregar a la mayoría del PCRs optimizado con la polimerasa de la DNA de AmpliTaq substituyendo el oro de AmpliTaq y agregando 10minuto, 95°C, pre-PCR, paso de progresión de la activación.

Los mismos resultados se pueden alcanzar sin el paso de progresión de la activación de pre-PCR agregando 10 adicionales o más ciclos de PCR. Bajo estas condiciones, la enzima se activa incremental durante los pasos de progresión de la desnaturalización de PCR.

También vea las polimerasas de PCR un artículo excelente en la estación de PCR.