Análisis de los productos de la polimerización en cadena

Análisis de la electroforesis del gel de la agarosa de los productos de la polimerización en cadena

A rápidamente y analice fácilmente y resuelven productos de la polimerización en cadena, un 3% NuSieve puede ser la agarosa usada de GTG (FMC Bioproducts, Rockland, YO) y el gel de la agarosa del 1% Seakem GTG (FMC Bioproducts) se ejecuta en TBE (Tris-borato de 89 milímetros, EDTA de 2 milímetros) o TAE (40 milímetros de Tris-acetato, el EDTA de 2 milímetros, pH aproximadamente 8.5). Las vendas resolved de la DNA son detectadas manchando los geles con aproximadamente 0.5 μg/mL del bromuro de etidio, seguidas destaining con agua o el verde 1 de SYBR® (Molecular Probes Inc., Eugene, O) y finalmente fotografiadas bajo iluminación ULTRAVIOLETA. Utilice un basepair 123 (punto de ebullición) o 1 escala del kilobasepair (kbp) como etiqueta de plástico conveniente para las estimaciones de la talla de los productos.

Otros métodos analíticos para analizar productos de la polimerización en cadena

Hay una variedad de otros métodos de detección disponibles para el análisis de producto de la polimerización en cadena, tal como etidio bromuro-manchó 8-10% geles de poliacrilamida funcionados con en almacenador intermediario de TBE, los geles o el punto meridional/manchas blancas /negras, subcloning y la secuencia directa, el análisis de la CLAR, y el uso de 96 microplates bien, de nombrar algunos. El reversos punto-borran la amplificación de la polimerización en cadena de las cosechadoras del método con la detección no radiactiva. La introducción de tintes fluorescentes a la polimerización en cadena, junto con un instrumento conveniente para la cuantificación en tiempo real, en línea de los productos de la polimerización en cadena durante la amplificación ha llevado al desarrollo de la polimerización en cadena cinética o de la polimerización en cadena cuantitativa. La polimerización en cadena cuantitativa (QPC) mide la acumulación del producto de la polimerización en cadena durante la fase exponencial de la reacción y antes de que la amplificación llegue a ser vulnerable, es decir, cuando los reactivo llegan a ser limitados. La prisma 7700 (biosistemas aplicados) de ABI y el LightCycler (productos bioquímicos moleculares de Roche, Mannheim, Alemania) son los dispositivos de detección fluorescentes integrados que permiten la fluorescencia que vigila o continuamente o una vez por ciclo. Estos instrumentos pueden también caracterizar productos de la polimerización en cadena por sus características de fusión, e.g., para discriminar mutaciones del singlebase de un salvaje-tipo secuencia. El sistema cuantitativo múltiplex recientemente diseñado de la polimerización en cadena de Mx4000™ (Strategene, La Jolla, CA) Puede generar y analizar los datos para los análisis fluorescentes múltiples del tiempo real QPCR.