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Análisis de los productos de PCR

Análisis del electrophoresis del gel del agarose de los productos de PCR

Analice y resuelva a rápidamente y fácilmente los productos de PCR, un 3% NuSieve puede ser el agarose usado de GTG (FMC Bioproducts, Rockland, YO) y gel del agarose del 1% Seakem GTG (FMC Bioproducts) ejecutado en TBE (Tris-borato de 89 milímetros, EDTA de 2 milímetros) o TAE (40 milímetros de Tris-acetato, el EDTA de 2 milímetros, pH aproximadamente 8.5). Las vendas resueltas de la DNA son detectadas manchando los geles con aproximadamente 0.5 μg/mL del bromuro de ethidium, seguidas destaining con agua o el verde® 1 de SYBR (Molecular Probes Inc., Eugene, O) y finalmente fotografiadas bajo iluminación UV. Utilice una escala 123-basepair (punto de ebullición) o 1-kilobasepair (kbp) como etiqueta de plástico conveniente para las estimaciones de la talla de los productos.

Otros métodos analíticos para analizar productos de PCR

Hay una variedad de otros métodos de detección disponibles para el análisis de producto de PCR, tal como ethidium bromuro-mancho' 8–geles de polyacrylamide del 10% ejecutados en almacenador intermediario de TBE, los geles meridionales o dot/blots, el subcloning y el ordenar directo, análisis del HPLC, y el uso de los microplates 96-well, de nombrar algunos. El reversos punto-borran la amplificación de las cosechadoras PCR del método con la detección no radiactiva. La introducción de tintes fluorescentes a PCR, junto con un instrumento conveniente para la cuantificación en tiempo real, en línea de los productos de PCR durante la amplificación ha conducido al desarrollo de PCR cinético o de PCR cuantitativo. PCR cuantitativo (QPC) mide la acumulación del producto de PCR durante la fase exponencial de la reacción y antes de que la amplificación llegue a ser vulnerable, es decir, cuando los reactivo llegan a ser limitados. El prisma 7700 (biosistemas aplicados) de ABI y el LightCycler (productos bioquímicos moleculares de Roche, Mannheim, Alemania) son los dispositivos fluorescentes integrados de la detección que permiten la fluorescencia que vigila o continuamente o una vez por ciclo. Estos instrumentos pueden también caracterizar productos de PCR por sus características que derriten, e.g., para discriminar mutaciones del singlebase de un salvaje-tipo secuencia. El sistema cuantitativo múltiplex™ recientemente diseñado de Mx4000 PCR (Strategene, la Jolla, CA) puede generar y analizar los datos para los análisis fluorescentes múltiples del tiempo real QPCR.