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De una manera que corresponde con el fortuity, si no la consecuencia, del baño de Archimedes y de la manzana del neutonio, [ 3.6 millones de años de viejo ] las huellas fósiles fueron notadas eventual una tarde en septiembre de 1976 por la colina de Andrew del paleontólogo, que cayó mientras que evitaba una bola del dung del elefante lanzada en él por el ecologista David occidental. Programa de lectura Del ~John, Conexiones Que falta: La caza para el hombre más temprano
El contenido proteínico de una célula se estima para consistir en millares de diversos tipos de proteínas con un rango dinámico de la expresión. La tecnología que se está utilizando actualmente implica la extracción de los componentes de proteína, el fraccionamiento de esta mezcla muy compleja, el proteolysis enzimático de cada especie separada y aislada, el análisis spectrometric total extenso y finalmente corresponder con los datos estructurales generados contra una base de datos de proteínas sabidas o de productos anticipados de la expresión del genoma.
Este procedimiento implica un paso inicial usando 1 o el electrophoresis de 2 dimensiones (DE). Usando 1-DE, las proteínas se separan en base de masa molecular; la técnica es reproductiva y se puede utilizar para las proteínas en el rango total del kDa–10 300, pero ha limitado la resolución. Para la separación de mezclas más complejas de la proteína, 2-DE es el método preferido. Esto implica el separar de las proteínas primero según su carga neta por un paso de progresión el enfocarse isoeléctrico y entonces, en la segunda dimensión, según su masa molecular que emplea el electrophoresis dodecyl del gel del sulfato-sulfate-polyacrylamide del sodio (SDS-PAGE) que da un eciency alto de la separación.
El spectrometry total (MS) es el método de opción para la identificación de las proteínas separadas, y spectrometry de 2-DE y total ahora representa una tecnología por la cual vario mil proteínas se puedan separar, detectar e identificar en una manera automatizada.
La metodología de Proteomics es hecha inicialmente por la separación y la localización de la proteína de 2-DE seguido por la supresión de las proteínas del interés que entonces experimentan la digestión proteolytic para rendir una mezcla de los fragmentos del peptide. Los peptides son analizados por el spectrometry total, usando inicialmente MALDI-MS para la determinación y la generación totales moleculares de una huella digital de la masa del peptide. Si la base de datos que busca en esta etapa rinde resultados ambiguos, un análisis spectrometric de la segunda masa, ESI-MS/MS, se utiliza para generar la información de la secuencia que se utiliza para buscar más riguroso de la base de datos.
Del espectro de la masa obtenido en el análisis de la mezcla del resumen de la proteína, la correspondencia de la masa del peptide o la huella digital total del peptide es decir las masas moleculares de los fragmentos del peptide, puede ser comprobada. A menudo, si la secuencia del aminoácido es suficientemente única y la exactitud total suficientemente arriba, la correspondencia total se puede utilizar para buscar bases de datos 12–15 para identificar la proteína con éxito sin la necesidad de otros análisis. Si, sin embargo, el buscar de la base de datos conduce a los resultados ambiguos, después análisis más futuros del MS, implicando el uso del spectrometry total en tándem (MS/MS), se emprenden secuencialmente en cada peptide en la mezcla para generar una secuencia, o la secuencia parcial, conocida como etiqueta de la secuencia, para estos peptides. Esto es alcanzada con frecuencia por el uso de ESI-MS/MS19 y un paso de progresión adicional de la purificación se debe realizar generalmente para separar los peptides de las sales y de los detergentes que pueden ser presente que causan la atenuación de la señal del peptide.
La base de datos adicional que busca con la masa molecular del peptide y la información de la etiqueta de la secuencia debe conducir a la identificación inequívoca de la proteína.
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