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El Ordenar De Maxam Gilbert

Cómo se ordena la DNA

DNA que ordena con el método de Maxam-Gilbert

Maxam-Gilbert que ordena con este método de DNA que ordena en vez de sintetizar la DNA in vitro y de parar las reacciones de la síntesis con los adaptadores de cadena, este método comienza con la DNA integral, extremo etiquetada y la hiende con los reactivo específicos bajos. Tan cómo este método trabaja con las bases del guanine, solamente el mismo principio se aplica a las cuatro bases; Primero extremo-etiquetamos un fragmento de la DNA que deseamos ordenar.

Éste puede ser 5’- o 3’- termina el etiquetado. Después, modificamos una clase de base. Aquí utilizamos el sulfato dimethyl (DMS) para desnaturalizar los guanines. (realmente, este reactivo también desnaturaliza adenines, pero no de una manera ése conduce a la hendidura del hilo de la DNA.) Como en el método de cadena del fin, no deseamos afectar cada guanine, o produciremos solamente los fragmentos minúsculos que no permitirán que determinemos la secuencia’de la DNA s. Por lo tanto, hacemos el methylation bajo condiciones suaves que conduzcan a un promedio de solamente un guanine desnaturalizado por hilo de la DNA. Después, utilizamos un reactivo (piperidine) que haga dos cosas: causa la pérdida de la base desnaturalizada, entonces él rompe la espina dorsal de la DNA en el sitio de la base perdida (el sitio apurinic). En este caso, el G en el centro de la secuencia fue desnaturalizado, así que la rotura del hilo ocurrió allí, produciendo un trimer etiquetado.

En otra molécula de la DNA, el primer G no se podría desnaturalizar, dando lugar a un fosfato etiquetado (la base y el azúcar serían perdidas en las hendiduras químicas). Finalmente, electrophorese los productos y las detectamos por autoradiografía, apenas como en el método del encadenamiento-fin. Por supuesto, necesitamos ejecutar tres otras reacciones que hiendan en las otras tres bases. Hay varias maneras de hacer esto. Por ejemplo, podemos debilitar los enlaces del glucósido a la adenina y al guanine con el ácido; entonces el piperidine causará rotura del depurination y del hilo después de ambos como y del Gs. Si electrophorese esto reacción de A + de G al lado de la reacción de G solamente, nosotros podemos obtener como por la comparación. Semejantemente, la hidracina abre los anillos del thymine y del cytosine, y el piperidine puede después quitar estas bases y romper el hilo de la DNA en los sitios del apyrumidine que resultan. En la presencia del NaCl del 1M, la hidracina es específica para el cytosine solamente, así que podemos ejecutar esta reacción al lado de la reacción de C+T y obtener los ts por la comparación.

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