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Cromatografía Líquida Del Alto-Funcionamiento del HPLC-

La Técnica De la Cromatografía Líquida Del Alto-Funcionamiento

El análisis de peptides y de proteínas ha sido revolucionado por la introducción del HPLC. El HPLC permite el análisis rápido y sensible de la estructura del peptide y de la proteína. Ha simplificado nuestro análisis en la comprensión de procesos biológicos y en el desarrollo del peptide y proteína basado los productos farmacéuticos.

Pero el HPLC no para allí, es aplicaciones en peptide y la purificación de la proteína continúa ampliándose en una tarifa extremadamente rápida. Por ejemplo la síntesis solid-phase del peptide y las técnicas recombinant de la DNA han permitido la producción de cantidades grandes de peptides y de proteínas que necesitan ser purificados altamente. También otra aplicación muy importante para el HPLC en la edad del poste-genomic es que sus técnicas están utilizadas extensivamente en el aislamiento y la caracterización de las proteínas de la novela.

La característica más significativa del hPLC sería su resolución excelente que se alcanza fácilmente bajo amplia gama de las condiciones para las moléculas muy de cerca relacionadas, así como las moléculas estructural absolutamente distintas. Esta característica es del hecho de que todos los modos interactivos de la cromatografía están basados en las fuerzas del reconocimiento que se pueden manipular sutil a través de cambios en las condiciones del elution que son específicas para el modo determinado de la cromatografía. Los peptides y las proteínas obran recíprocamente con la superficie cromatográfica de una manera específica de la orientación, de la cual su tiempo de la retención es determinado por la composición molecular de las regiones específicas del contacto. Para polipéptidos y proteínas más grandes que adopten un grado significativo de la estructura secundaria y terciaria, la región cromatográfica del contacto abarca una proporción pequeña de la superficie molecular total. Todos los procesos biológicos dependen de interacciones específicas entre las moléculas y la cromatografía de la afinidad explota estas interacciones específicas para permitir la purificación de una biomolécula en base de su función biológica o estructura química individual.

Lazos de la retención y de la anchura de banda del HPLC

El tiempo de la retención o el tr en HPLC es la época llevada para un solute el paso a través de una columna cromatográfica. Este tiempo de la retención se mide como el tiempo tomado por el solute, después de la inyección, para emerger de la columna y para ser detectado. Para permitir que los tiempos de la retención sean comparados a diversas columnas o bajo diversas condiciones, la época de la retención de un solute se compara normalmente con la época de la retención de una molécula que no se conserve en la columna específica del interés. Esto permite que el factor unitless k de la capacidad ' de un solute sea expresado en los términos del tiempo tr de la retención, con el lazo