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FACS

La Técnica de FACS

Los linfocitos de reclinación abarcan a muchas subpoblaciones funcionales, que se identifican y se distinguen de uno a en base de la expresión diferenciada del heredero de las proteínas de la superficie de la célula, que se pueden detectar el usar de los anticuerpos específicos.

Flujo Cytometry

Una herramienta de gran alcance para definir y cuantificar linfocitos es el cytometer del flujo, que detecta y cuenta las células individuales que pasan en una secuencia a través de un rayo laser. Un cytometer del flujo equipado para separar las células identificadas se llama un compaginador fluorescencia-activado de la célula (FACS). Estos instrumentos se utilizan para estudiar las características de los subconjuntos de la célula identificados usando las proteínas monoclonal de la ce'lula-superficie de los anticuerpos. Las células individuales dentro de una población mezclada primero son marcadas con etiqueta por el tratamiento con los anticuerpos monoclonal específicos etiquetados con los tintes fluorescentes, o por los anticuerpos específicos seguidos por los anticuerpos etiquetados de la contra-inmunoglobulina. La mezcla de células etiquetadas entonces se fuerza con un mucho volumen del arger de salino a través de un inyector, creando una secuencia fina del líquido que contiene las células espaciadas solo en los intervalos. Pues cada célula lo pasa a través de un rayo laser dispersaron la luz laser, y cualquier molécula del tinte limitada a la célula será excitada y despedirá luz fluorescente.

Los tubos sensibles del photomultiplier detectaron la luz dispersada, que da la información sobre la talla y el granularity de la célula, y las emisiones del florescence, que dan la información sobre el atascamiento de los anticuerpos monoclonal etiquetados y por lo tanto en la expresión de las proteínas de la ce'lula-superficie por cada célula. En el compaginador de la célula, las señales pasadas de nuevo al ordenador se utilizan para generar una carga eléctrica, que se pasa del inyector a través de la secuencia líquida en el tiempo exacto que la secuencia rompe para arriba en gotitas, cada uno que no contiene no más que una célula; las gotitas que contienen una carga se pueden entonces desviar de la secuencia principal de gotitas mientras que pasan entre las placas de la carga opuesta, para atraer gotitas positivamente cargadas a una placa negativamente cargada, y viceversa. De esta manera, las subpoblaciones específicas de células, distinguidas por el atascamiento del anticuerpo etiquetado, se pueden purificar de una población mezclada de células. Alternativomente, agotar una población de células, el mismo fluorochrome se puede utilizar para etiquetar diversos anticuerpos dirigidos en las proteínas de la etiqueta de plástico expresadas por los varios tipos indeseados de la célula.

El Clasificar De la Célula

El compaginador de la célula se puede utilizar para dirigir las células etiquetadas a un canal inútil, conservando solamente las células sin etiqueta. Cuando las células se etiquetan con un solo anticuerpo fluorescente, los datos del cytometer del flujo se visualizan generalmente en la forma de un histograma de la intensidad de la fluorescencia contra números de la célula. Si se utilizan dos o más anticuerpos, cada uno juntado a diverso tinte fluorescente, después los datos son visualizado más generalmente adentro él forman de un diagrama de dispersión de dos dimensiones o como diagrama del contorno, donde la fluorescencia de una teñir-etiquetada anticuerpo se traza contra la de un segundo, con el resultado que una población de las células que etiquetan con un anticuerpo se puede subdividir más a fondo por su etiquetado con el segundo anticuerpo. Examinando una gran cantidad de células, fluye la lata cytometry da datos cuantitativos sobre el porcentaje de las células que llevan diversas moléculas. Pues la potencia de la tecnología de FACS ha crecido, más anticuerpos etiquetados con los tintes fluorescentes distintos se pueden utilizar progresivamente en el mismo tiempo.

Tres, cuatro e igualan cinco análisis de color se pueden ahora dirigir por las máquinas muy de gran alcance

Protocolos de FACS