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Cultura Bacteriana De los Media Nutrientes

Información sobre el crecimiento de culturas bacterianas usando los caldos de los media y las placas nutrientes de la cultura

Índice:

Asuntos bacterianos de la localización de averías y del foro de la cultura

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¿Cuál es definición nutriente de los media?

"químicamente, como el resto de las células vivas, los microorganismos consisten en el nitrógeno orgánico e inorgánico y las sales mineral; es por lo tanto necesario para crecer un microorganismo, ese estas tres clases de sustancias se haga disponible, junto con el oxígeno, que es un esencial a la vida de todas las estructuras vivas. Finalmente cierta cantidad de humedad es absolutamente necesaria." (Besson.)

Un alimento se preparó para el crecimiento de microorganismos se da el media general del alimento del término. Una gran cantidad de microorganismos crecerán fácilmente en o sobre media nutrientes fácilmente disponibles, como la leche, el caldo, etc. Algunos isms microorgan tienen requisitos del alimento extensamente que diferencian y necesitan para los media nutrientes del crecimiento que diferencian extensamente en su composición.

Sin embargo, hay algunas reglas generales que se deben aplicar en la preparación de todos los media nutrientes para el uso de microorganismos. Éstos están abreviadamente, eso:

Cada medio de cultivo debe

1. Contenga las sustancias necesarias para el crecimiento.
2. Esté de reacción conveniente.
3. Conténgase en los recipientes que producen la protección contra la contaminación de fuentes exteriores.

Clasificación de media nutrientes

Los medios de cultivo se pueden clasificar como:

I. Media naturales como ocurriendo en la naturaleza, e.g., la leche, la patata y los otros vehículos, carne y productos de carne, sangre y suero de sangre, huevo, suelo, etc.

II. Media preparados, es decir, hechos en el laboratorio. Éstos son:

(a) De la composición química desconocida; e.g., agar, gelatina, etc nutrientes.

(6) sintético; es decir, composición química sabida, e.g., solución de Giltay para los organismos de desnitrificación.

O como:

I. Media Líquidos. Éstos incluyen:

A. Media hechos del tejido fino animal y de los líquidos, e.g., caldo nutriente, caldo del suero, caldos del carbohidrato, leche, sangre, solución del peptone del nitrato, solución de Dunham.

B. Media hechos del tejido fino vegetal. Entre éstos esté: Extracto de malta (cebada germinada), mosto de la cerveza, extracto de levadura, infusión del heno, zumos de fruta naturales, vinos (zumos de fruta fermentados).

C. Media sintetizados.

II. Media Sólidos. Este se clasifique el mav como:

A. Liquefiable, e.g., agar nutriente, gelatina nutriente.

B. No-non-liquefiable, incluyendo: 1. Los media líquidos en un estado natural pero que, una vez que esté solidificado, no se puede licuefacer por los medios físicos, e.g., media preparados de los líquidos albuminosos y los tejidos finos tales como huevo, suero de sangre, etc., o los media sintetizados solidificaron con el silicato del sodio.

2. Media que son sólidos en el estado natural, e.g., media vegetales tales como patata, zanahoria, plátano, etc.

 

 

EJERCICIO 3. TITULACIÓN DE MEDIA

La titulación de los media bacteriológicos hechos de la carne es un paso de progresión importante en su preparación, pues los microorganismos son sensibles a la reacción del substrato nutriente.

Procedimiento. El método siguiente se utiliza para los media del laboratorio, a excepción de la leche, del mosto, de la sidra, del vinagre, de los zumos de fruta, del etc. Vea p. 22.

1. Ponga 5 c.c. del media que se probarán y de 45 c.c. del agua destilada en una cápsula de evaporación.

2. Ebullición enérgicamente un minuto con el revolvimiento de la constante (eliminar todo el CO2 disuelto que se coloca como acidez).

$. agregan 1 solución del phenolphthalein de c.c. para el indicador.

4. Titule mientras que es caliente, preferiblemente mientras que hierve, con el hidróxido del sodio N/20, o el ácido hidroclórico N/20 como el caso de mands. ' un débil pero el color color de rosa de la permanente distinta marca el punto final. Este color debe seguir siendo permanente por cinco minutos.

5. Compute y registre la reacción del media grados de una escala más llena, que es el número de los contadores cúbicos del centi de normal * ácido o álcali presente en 1000 cúbicos

* Una solución se dice para ser normal cuando contiene alent equivalente de 1 gramo de un ácido o de una base en 1 litro.

Un equivalente del gramo de un ácido o de una base es esa cantidad a la cual es equivalente o neutralizará la molécula de 1 gramo de un ácido monobásico o de una base del mon-a'cido.

La ventaja del sistema es ese 1 c.c. de cualquier solución normal neutralizará o será exactamente exactamente equivalente a 1 equiva del miligramo prestado de cualquier ácido o base. (Noyes, Wm. A., libro de textos de Chemistry, 1913, p. 184.)

TITULACIÓN DE LOS MEDIA 21

centímetros del medio, usando el phenolphthalein como cator del indi.

6. Los entornos alcalinos son denotados colocando a menos () muestra antes del número de grados de alcalinidad; así, 15 indicarían que el media era 15 alcalinos, o que 15 c.c. el ácido normal se debe agregar por litro al ize neutral él.

Los media ácidos son denotados colocando a más (+) muestra antes del número de grados de acidez; así, +15 indicarían que el media era 15 ácidos o que 15 c.c. del álcali normal debe ser agregado por litro al neu tralize lo.

Ejemplo.

Lectura de la bureta después de titular 5.4 c.c.

Lectura de la bureta antes de titular 2.0 c.c.

Número del NaOH de c.c. N/20 requerido

para neutralizar el ácido en 5 c.c. de

el 4 medio c.c.

Si 5 c.c. del medio (que es 1/20 de 100 c.c.) requiera

3. 4 c.c. de 1/20 NaOH normales para neutralizar los pres ácidos ent, 100 c.c. del media requeriría 20X3.4 c.c. o 68 c.c. de 1/20 NaOH normales.

Pues una solución normal es 20 veces la fuerza de una solución 1/20 normales, 100 c.c. del media requeriría 1/20 de 68 c.c. o 3.4 c.c. del NaOH normal para la neutralización; y un litro o 1000 c.c. de media requeriría 10X3.4

c. c. o 34 c.c. NaOH de N/l para la neutralización; es decir, el media es el ácido 34. Una escala más llena. Éste es el litro del media.

Cuando ácido N/20 o álcali y una porción de 5 c.c. del media (en 45 c.c. del agua destilada) se utilizan, cada 1/10 de 1 c.c. corresponde a 1 escala más llena.

Ajuste de la reacción. Si se desea para dejar el media con a, e.g., reacción +15, tenemos:

22 GENERAL MICROBIOLOGÍA

Acidez del media

(+34) 3.4 c.c. por 100 c.c. del media

Acidez deseada (+15). . 1.5 c.c. por 100 c.c. de la cantidad media de álcali normal

ser agregado 1.9 c.c. por 100 c.c. del media

o 10X1.9 c.c. = 19 c.c. NaOH de N/l por 1000 c.c. del media

Puesto que las soluciones normales están de fuerza igual al lado del volumen, es decir, 1 c.c. de N/l el ácido apenas neutralizará 1 c.c. del álcali de N/l, será visto fácilmente que si 15 c.c. El NaOH de N/l se requiere para neutralizar el ácido presente en 1 litro de media, después debe haber presente en ese litro exactamente 15 c.c. el ácido de N/l, o de nosotros debe decir que la reacción es (+ 15) quince grados de ácido. Para cualquier otro grado de acidez agregue bastante álcali normal para reducir la acidez a la punta deseada.

La reacción de un media cambia algo después de su neutralización, especialmente durante la esterilización, pero también sobre estar parado luego en la temperatura ordinaria. Este cambio es hacia una acidez creciente, y es el más marcado de los media ricos en dextrosa. Por lo tanto es necesario determinar el título de un media cuando se utiliza más bien que cotizar las figuras obtenidas antes de la esterilización.

LECHE, SIDRA, VINAGRE, MOSTO, Y ZUMOS DE FRUTA

Procedimiento. 1. En una medida 5 c.c de la cápsula de evaporación. del media que se probará, por medio de la pipeta conveniente. Haga hasta 50 c.c. con agua destilada.

No caliente. Los media antedichos no se deben calentar antes de la titulación, mientras que contienen los ácidos volátiles u otras sustancias orgánicas que puedan colocarse como ácido y que pueden ser eliminados hirviendo,

2. Agregue 1 solución del phenolphthalein de c.c..

3. Agregue, gradualmente, de una bureta exacta, NaOH IN/20 hasta que aparece el primer color de rosa permanente.

4. Observe la cantidad de NaOH requerida para la titulación.

5. Ejecute siempre los artículos con llave de validación.

LECHE 23

6. Expediente como grados de acidez el número de c.c. del NaOH de N/l que sería requerido para neutralizar un litro de media.

LECHE

La leche tiene valor como media nutriente para los microorganismos porque: Es un nutriment natural y casi ideal para una gran cantidad de microorganismos. Su composición, caseína 3.40%, 3.50% grasa del ing del averag y albumen, 4.50% azúcares de leche, 0.75% ceniza, 87.75% riegan, son una evidencia que equipa el alimento en una forma excelente para la mayoría de los microorganismos.

Las actividades bioquímicas de muchas bacterias las revelan los uno mismo definitivamente en los cambios que ordeñan, especialmente leche del tornasol, experimentan. Muchos de estos cambios son macro vista scopically. Algunos de éstos son:

(a) Producción De Ácido. La lactosa, C^IfeOn (azúcar de leche), primero se invierte, formando dos moléculas del hexose, 1 mol. Dextrosa y 1 mol. Galactosa.

Y cada molécula de las producciones del hexose dos moléculas de ácido láctico:

hexose = ácido láctico.

C 6 H 12 6 = 2CH 3 CH(OH)COOH.

El tornasol azul se da vuelta rojo.

(b) Producción Del Álcali. El tornasol se convierte en un azul más oscuro. Este cambio acompaña muy a menudo el peptonization.

(c) Reducción (decoloración del tornasol). Esto es debido a la reducción de la materia del colorante (tornasol). Muchos microorganismos secretan las enzimas que producen el hidrógeno. El hidrógeno combina con el tornasol, reduciéndolo a su leuco-compuesto (descolorido). (el azul de Methylen se convierte en color menos debajo como condiciones.) Que esto es una reducción y no una destrucción puede ser demostrado sacudariendo la cultura decolorada con algunos centímetros cúbicos de peroxid hidráulico de la GEN. Las bacterias que decoloran el tornasol también

24 GENERALES MICROBIOLOGÍA

reduzca el peroxid del hidrógeno a E^O y al oxígeno naciente que oxida de nuevo el tornasol reducido (que muestra por el tion del reac de la leche el tipo de microorganismos presentes). La oxidación re ocurre lentamente bajo condiciones naturales. La reducción puede ocurrir cuando la leche es ácido, alcalino o neutral.

(d) Cuajada con la producción de ácido. La caseína, como la mayoría de las proteínas, es amphoteric, es decir, es capaz de reaccionar ambos como un ácido débil y base débil. La caseína de otra manera insoluble se encuentra para estar en la leche en un estado parcialmente disuelto (coloidal), debido a su combinación con las sales del calcio: el calcio que fue combinado antes con la caseína, con la producción del ácido por ciertos organismos micro, ahora combina con el ácido láctico; consecuentemente los precipitados de la caseína, causando la cuajada (coagulación). El mus del lit es decididamente dado vuelta rojo. La leche que come una cuajada ácida titulará sobre +50.

(e) Cuajada Del Cuajo. La coagulación puede también ocurrir cuando el media es neutral o solamente ácido del slightly^. Este favorable duction de la cuajada es debido a a cuajo-como la enzima producida por los microorganismos, y es similar a la acción del cuajo usado para cuajar la leche en queserías.

Muchas especies spore-forming se encuentran bajo grupo de organismos cuajo-que producen. La cuajada del cuajo es seguida generalmente por el peptonization.

(/) Peptonization. La cuajada producida por el ácido o ren red-formando microorganismos puede desaparecer gradualmente, el ing solamente a del leav suero-como líquido. Esto es causada por ciertas bacterias que produzcan las enzimas proteolytic que digieren la cuajada y la hacen soluble. Esta licuefacción de favorables teins sólidos tiene gusto de gelatina, del fibrin, del blanco hervido del huevo, de la cuajada de leche, del etc., es debido a dos grupos de enzimas, de pepsina y de trypsin.

La pepsina del cuerpo animal actúa solamente en un media ácido (presente en el estómago).

El trypsin del cuerpo animal actúa solamente en el entorno alcalino (presente en el intestino).

PREPARACIÓN DE LA LECHE 25 DEL TORNASOL

El pepsinand trypsin-como las enzimas producidas por los organismos micro no se puede separar así por su actividad en un media de cierta reacción; esto varía con la especie del microorganismo y con condiciones ambientales. El tonization del pep de la leche ocurre generalmente en un hilo neutro, levemente alcalino, o más infrecuentemente la reacción levemente ácida.

Algunos organismos peptonizan la leche sin la formación de una cuajada del cuajo.

(g) Producción Del Gas. Esto es caracterizada por para el mation de las burbujas del gas en la leche, y es accom panied generalmente por la formación de la cuajada ácida. La cuajada se contrae muy comúnmente, causando la protuberancia del suero.

EJERCICIO 4. PREPARACIÓN DE LA LECHE DEL TORNASOL

Aparato. Haber separado fresca o leche desnatada; aparato del tion del titra; NaOH N/20; phenolphthalein (indicador); pipeta de 5 c.c.; azolitmin, solución del 2%; embudo que llena; martillo del sujetador; tubos de prueba estériles; aparato para el zation del sterili del vapor.

Método. 1. Haber separado fresca o la leche desnatada debe ser utilizada. La leche entera es indeseable a causa de su proporción de grasas.

2. Titule y registre la reacción de la leche. Si la leche titula sobre el ácido 17, la reacción se debe ajustar a +15. amargos, cuajado o uncurdled la leche, después del zation del neutrali, no hace un media nutriente deseable para los microorganismos, por lo tanto, la leche que título está sobre el ácido 20-25 debe ser desechada.

La leche fresca varía en acidez a partir del 12 a 18. La leche con una acidez sobre 18 al phenolphthalein no dará un color azul satisfactorio con azolitmin, como en 18 comienza a mostrar la coloración ácida.

3. Agregue el 2% de una solución de estándar del litmin azo de Kahlbaum. El tornasol o el azolitmin se agrega simplemente como cator del indi y debe estar de suficiente fuerza para no diluir la leche a cualquier fragmento.

26 GENERAL MICROBIOLOGÍA

4. Mezcle la leche y el azolitmin a conciencia y tubo, usando aproximadamente 8 c.c. del tornasol ordeñe en cada tubo.

Observe. El cuidado se debe tomar para evitar que la leche venga en contacto con la tapa de los tubos, pues hará las fibras del algodón adherir al tubo. Esto se puede evitar por el uso de un "embudo que llena."

5, esterilizan calentando en el vapor que fluye por veinte minutos en cuatro días sucesivos. La leche es difícil de esterilizar, debido a las esporas resistentes que están con frecuencia presentes. Si se desea para esterilizar un bulto más grande que en tubos, la época de la calefacción debe ser alargada.

Precaución: El sobrecalentar tiende para cambiar (caramelize) el azúcar de leche. El color del azolitmin puede también ser destruido. Estos cambios no son deseables.

EJERCICIO 5. PREPARACIÓN DE LA PATATA DE LA GLICERINA

Un número de organismos chromogenic y patógenos prosperan especialmente bien en los media que contienen la glicerina. La manera de la cual la glicerina favorece el crecimiento de estos isms del órgano no se sabe, pero en algunos casos que se parece ser utilizado directamente para la construcción de la grasa (losis de Bact. Tubercu).

Aparato. Patatas sanas grandes; cuchillo cilíndrico de la patata, o perforador del corcho; cuchillo ordinario; vaso; bonate del coche del sodio, 1: solución 1000; glicerina, solución del 5%; tubos de prueba estériles grandes, o tubos de la patata de los roux; algodón absorbente o barra de cristal corta; 1 pipeta de c.c.; agua destilada; aparato para la esterilización del vapor.

Método. 1. Limpie cuidadosamente una o dos patatas grandes.

2. Por medio de un cuchillo de la patata o de un perforador cilíndrico del corcho, cilindros cortados de la patata, 4 a 6 centímetros. Desea y 1.5 a 1.8 centímetros. En diámetro. Con un cuchillo ordinario, parta en dos cada cilindro por un corte diagonal de modo que cada pedazo se asemeje en dimensión de una variable a una inclinación de agar. Quite cualquier porción de la piel en estos pedazos.

3. Coloque en un vaso y remoje en un diluído (1: 1000) solución del carbonato de sodio * por veinticuatro horas solamente.

* El carbonato de sodio se utiliza para neutralizar los ácidos naturales de la patata.

PREPARACIÓN DE LA PATATA DE LA GLICERINA

27

4. No transfiera los pedazos a una solución del 5% de la glicerina en el agua para veinticuatro horas más solamente.

5. Coloque en los tubos estériles preparados como sigue: Seleccione los tubos de prueba grandes adicionales 1.5 a 2 centímetros. En diámetro y limpio y seco ellos. Ponga un pedazo pequeño de la barra del algodón absorbente o del cristal 0.5 centímetro. X2.5 centímetro. En el fondo de cada uno. Tape con algodón y esterilice en la manera generalmente. (los tubos de los roux necesitan ser limpiados y ser esterilizados solamente.)

Momentos antes de introducir los pedazos de la patata, agregue cerca de 1 c.c. del agua destilada a cada tubo, usando un pette del pi. La patata no debe tocar el agua.

6. Esterilice calentando en 100 G. en cuatro sucesivos

días por veinte minutos cada día.

Fig. 8. Tubos De la Patata. (Orig. Northrup.)

Precaución: El tiempo indicado en 3 y 4 se debe adherir terminantemente, las patatas tendrá que ser desechado a causa del tion del contamina con los organismos spore-forming resistentes.

REFERENCIA

SMIRNOW, M. R.: El valor de glycerinated la patata como medio de cultivo. Centavo. F. Bakt., II Abt., Bd. 41, p. 303.

28 GENERAL MICROBIOLOGÍA

EJERCICIO 6. PREPARACIÓN DE LA INFUSIÓN DE LA CARNE

La infusión de la carne es la fundación de los media nutrientes ordinarios, como el caldo, la gelatina y agar, y también de una gran cantidad de media nutrientes especiales, como los caldos del azúcar, etc.

Bajo estas direcciones la suficiente infusión de la carne pre se pela para hacer 1 litro por cada uno del caldo, de la gelatina y del agar nutrientes.

Aparato. 1.5 kilogramos (3 Ibs.) Carne de vaca magra fresca finalmente tajada; agua del golpecito de 1500 c.c.; cubo del agateware de 3.5 litros; embudo grande; soporte del anillo; limpie el paño; taza que mide de 1 litro; tres frascos de 1 erlenmeyer estériles del litro; refrigerador; aparato para la esterilización del vapor (autoclav preferible).

Método. 1. A 1.5 kilogramos de carne de vaca magra finalmente tajada, fresca en un cubo del agateware de 3.5 litros, agregue 1500 c.c. del agua del golpecito, * no se mezcle a conciencia y permita para estar parado en un lugar fresco (refrigerador preferido) por dieciséis a veinticuatro horas solamente.

2. Instale un embudo grande en un soporte del anillo y ponga un pedazo del paño limpio en el embudo. Coloque una taza que mide bajo el embudo.

3. Filtre la infusión de la carne a través de la estopilla limpia, extrayendo a conciencia todo el jugo. 1.5 litros deben ser recuperados. Si ocurre alguna pérdida haga hasta 1500 c.c., usando el agua del golpecito.

Este líquido sanguineous que resulta contiene las albúminas solubles de la carne, de las sales solubles, de los extractives y de la materia que colorea, principalmente hemoglobina.

4. Coloque 500 c.c. de la infusión de la carne en cada uno de tres frascos de 1 erlenmeyer estériles del litro. Substituya los enchufes, y caliéntelos en el autoclav en 120 C. por treinta minutos. Esto es un procedimiento más seguro que la calefacción por un tiempo más largo en vapor que fluye.

Durante esta calefacción las albúminas coagulables por calor se precipitan.

_ él tener ser encontrar necesario y también más conveniente para preparar y esterilizar carne infusión antes proceder con preparación diferente media en que él ser utilizar,

* Aproximadamente 500 c.c. del agua a cada libra de carne.

PREPARACIÓN DEL CALDO NUTRIENTE 29

a causa de los organismos spore-forming resistentes que están casi universal presentes en la carne tajada; la economía del tiempo también es una consideración. A menos que esté esterilizado el immedi ately, infusión de la carne se descomponga rápidamente debido a la abundancia y a la diversidad de la microflora adquirida durante los varios procesos de la preparación para el mercado.

La infusión hecha de la carne de vaca magra recientemente tajada variará en acidez entre una escala más llena +15 y +25. Si la reacción es marcado más baja o más alta, la acción microbiana está ocurriendo, que es, o puede ser, perjudicial al valor nutritivo del media en el cual se utiliza la infusión de la carne.

La infusión contiene la materia albuminosa muy pequeña y consiste principalmente en las sales solubles del músculo, de los ciertos extractives, y de las materias que colorean alteradas junto con los rastros leves de la proteína no coagulados por el calor.

EJERCICIO 7. PREPARACIÓN DEL CALDO NUTRIENTE

El caldo nutriente es el líquido estándar empleado para los microorganismos tivating del cul. Es prácticamente un peptone taining con del té de carne de vaca. El peptone, una proteína soluble no coagulable por calor, se agrega para substituir las sustancias albuminosas coaguladas que se precipitan cuando se esteriliza la infusión de la carne. La sal se agrega para tomar el lugar de los fosfatos y de los carbonatos, algunos de los cuales son precipitados en el ajuste de la acidez del media por el hidróxido del sodio.

La reacción de media nutrientes ordinarios se ajusta a cerca de +15 con phenolphthalein como indicador, pues se encuentra que la mayoría de los microorganismos crecen lo más mejor posible en un neutral medio o levemente alcalino al tornasol.

Cuando se requiere que los media nutrientes estén claros, el albumen del huevo reducido a una goma lisa con agua (o el blanco batido receptor de papel de un huevo) se agrega. Por la coagulación, el albumen del huevo quita todas las partículas pequeñas adentro suspen mecánicamente el sion que pasaría de otra manera a través del papel de filtro.

30 GENERAL MICROBIOLOGÍA

Este proceso es el más eficiente cuando los lates del coagu del albumen del huevo lentamente.

Pues el albumen del huevo comienza a coagular en cerca de 57 C. es absolutamente imprescindible para los resultados el bueno que el medio se refresque a 40-50 C. antes de la adición del albumen del huevo.

Aunque el albumen del huevo contiene cantidades pequeñas de materia uble del solenoide no coagulable por calor, como azúcar, extractives y la materia mineral, que servirá como alimento microbiano, su propósito en media nutrientes está sobre todo para su acción fying del clari.

Aparato. infusión estéril de la carne de 500 c.c.; agua del golpecito de 500 c.c.; 10 gms. Peptone, Witte; 5 gms. Sal; 10 gms. Albumen del huevo (o un huevo); cubo de 3.5 a'gata-mercanci'as del litro; aparato de la titulación; NaOH N/20; NaOH De N/l; phenolphthalein (indicador); agua destilada; pipeta de 5 c.c.; barra de revolvimiento grande; equilibrios gruesos; mechero de gas grande; embudo grande; papel de filtro trenzado; embudo que llena; tubos de prueba estériles; frasco estéril de 1 litro; aparato para la esterilización del vapor -.

Método. 1. Ponga el contenido de un frasco de la infusión de la carne (500 c.c.) en un cubo de la ágata y agregue 500 c.c. del agua del golpecito.

2. Agregue el 1% del peptone de Witte y 0.5% de sal.

3. Agregue 10 gms. Del albumen del huevo que se ha mezclado bien con 100 c.c. del agua del golpecito. (puesto el albumen del huevo en un vaso y agregue bastante agua para formar una goma. Revuelva hasta que es liso. Entonces agregue el agua restante. Un huevo * bien batida se puede substituir.) Mezcle todos a conciencia.

4. Calor en el vapor que fluye por minutos forty-five o en el autoclav en 120 C. por treinta minutos.

5. Titule con NaOH N/20.

6. Ajuste la reacción del media a +15 con el NaOH normal o HC1 normal. Retitrate y ajusta otra vez en caso de necesidad.

7. El contrapeso y observa el peso.

8. Hierva quince minutos sobre una llama libre, revolviendo con stantly.

* No es necesario agregar el agua al huevo.

GELATINA 31

9. Counterpoise y restablezca cualquier pérdida por la evaporación con agua destilada.

10. Fíltrese mientras que el papel de filtro trenzado directo caliente que hervía acaba de lavarse previamente con el litro del 1/2 de agua hirvienda.

11. Pase el líquido filtrado a través del mismo papel hasta que está brillante y claro.

12. Llene treinta tubos de prueba estériles, usando aproximadamente 8 c.c. de este media para cada tubo. Ponga el caldo restante en un frasco grande, estéril.

13. Caliente los tubos y el contenido de prueba en vapor que fluye veinte minutos en tres días sucesivos.

14. Para esterilizar un frasco grande de caldo, caliente por veinte minutos cuatro días en la sucesión.

GELATINA

La gelatina es una de las herramientas del microbiólogo. Como tal, responde a dos propósitos: como un medio de cultivo sólido, un dispositivo técnico por los cuales el aislamiento de una sola especie del microorganismo sea hecho posible, y, a esos organismos que secreten las enzimas proteolytic, ella sirve como material nitrogenado del alimento.

La gelatina lleva la distinción de ser la primera sustancia usada para un medio de cultivo sólido. Este media era origi nated en 1882 de Roberto Koch y tiene desde revolucionó la ciencia de la microbiología. Antes de la introducción de media sólidos, el aislamiento de una sola especie del microorganismo implicó mucha dificultad y casi siempre cierta medida de incertidumbre. Para cotizar de Jordania: "no puede ser una coincidencia mera que los grandes descubrimientos en bacteriología siguieron rápidamente en los talones de esta mejora técnica importante, y es quizás no demasiado para demandar que la subida de bacteriología del los congeries de incompleto aunque las observaciones importantes en la posición de una ciencia biológica moderna deben ser anticuadas a partir alrededor de este período (1882)."

Las primeras placas de Koch fueron hechas por que vertía licuefechas

32 GENERAL MICROBIOLOGÍA

gelatina nutriente sobre pedazos estériles, planos de cristal. El estudiante en llegar a ser familiar con las dificultades pre de pelar las placas satisfactorias con el uso del "plato de petri" apreciará ésos resueltos con en las primeras placas de la gelatina de Koch.

La gelatina es una proteína, es decir, un material nitrogenado del alimento. Contiene mientras que sus elementos esenciales carbón, hidrógeno, oxígeno, y nitrógeno (otros elementos, sin embargo, por ejemplo el sulfuro, el fósforo, el etc., pueden estar presentes). Su fórmula empírico según Schiitzenberger y bourgeois es C7eHi24N24O29, pero tal fórmula da solamente la información de los principales componentes y permite que uno forme una cierta idea de la talla enorme de la molécula; no se da ninguna idea de la estructura de la molécula. Sin embargo, digiriendo con el ácido sulfúrico diluído, la gelatina analiza de la misma manera que las proteínas, rindiendo glycin, leucin y otros aminoácidos grasos.

La gelatina es una proteína animal, pero hace caliente ocurre como gelatina en los tejidos finos animales. Existe allí como el colágeno del minoid del albu que es el componente sólido principal del tejido fino conectivo fibroso, siendo encontrado también, pero en un porcentaje más pequeño, en cartílago, hueso y el ligamento. El colágeno de estas varias fuentes no es idéntico en la composición y la gelatina varía correspondientemente, e.g., la gelatina del cartílago diferencia de la de otras fuentes en que contiene un porcentaje más bajo del nitrógeno.

La gelatina, el cuerpo resultando de la hidrólisis del colágeno, es también un albuminoide. (Hofmeister mira esta hidrólisis como procediendo según la ecuación:

colágeno + agua = gelatina

pero en tratar de las sustancias de tal composición variable,

los fórmulas empíricos de esta clase no tienen ninguna gran significación).

Comercialmente, está preparada de ciertas clases de huesos

y partes de piel. Se seleccionan, se lavan y se extraen éstos

GELATINA 33

por el agua y con un ácido diluido (hidroclórico), con rela tively poca exposición al calor, para únicamente posible de los productos flúidos de la desintegración de la acción formar y la potencia que convierte en gelatina de la solución resultante no es destruida.

La gelatina del término se deriva del gelare latino del verbo, para congelar, y llama para importar del atributo principal de esta sustancia, de que de su característica que se atiesa o que convierte en gelatina.

La gelatina pertenece a esa clase interesante de las sustancias llamadas los coloides. Es un ejemplo típico de la clase, y exhibe las características características de la clase. Los coloides, en contraste marcado con los cristaloides, no se cristalizan, fácilmente no difunden y son impermeables el uno al otro. Las últimas partículas de coloides son mucho más pequeñas que qué ordinariamente llamaríamos una subdivisión física, solamente las moléculas algo más en gran parte que químicas; el diámetro de las partículas más pequeñas de una solución coloidal, e.g., oro coloidal rojo, que se han contado por medio del alcance ultra-micro, es 6 millimicrons o 6 milésimos de un micrón. Un micrón es un milésimo de un milímetro. (las bacterias son mucho más grandes, el visible más pequeño por medio del microscopio ordinario que es a partir 0.3 a 1.0 micrones de diámetro.) Por lo tanto sus reacciones están paradas situado a mitad del camino entre la comprobación y los cambios químicos de la materia, como puede ser visto considerando las características de la gelatina.

La gelatina absorberá una cantidad considerable de agua caliente (es casi insoluble en agua fría) y se hincha para arriba, rindiendo una jalea que, sobre la aplicación del calor, derrita a una solución viscosa, pegajosa que gelatinice otra vez sobre refrescarse. El nombre del hydrogel se aplica a los coloides que muestran esta característica. Los media ordinarios de la gelatina para el trabajo microbiológico contienen gelatina del 12% a del 15%. Cuando está secada en los peratures medios del tem, la gelatina se puede redisolver otra vez y redried adentro definitivamente. De esta característica se llama un coloide reversible para distinguirla de otros coloides que, cuando su estado físico se cambia una vez, sean insolubles, e.g., caseína y ácido silícico.

34 GENERAL MICROBIOLOGÍA

Si superdried en cerca de 130 C., o sobrecalentado cuando en el estado gelatinoso por un tiempo corto en una temperatura sobre 100 C., o durante mucho tiempo en 100 C., como en la inter esterilización mittent, la gelatina está así que modificado que su potencia de redisolución o resolidifying respectivamente está perdida. En superdrying, la pérdida de la característica de redisolución se pone al contacto demasiado cercano de las partículas constitutivas, un cambio en el estado físico; en la gelatina sobrecalentada, la pérdida de la potencia resolidifying es probablemente debido al tion de la molécula de la gelatina, un fenómeno más puramente químico del disintegra. Esta pérdida de la característica gelatinizing también es causada por las actividades enzimáticas de muchos microorganismos y es también un proceso de la desintegración.

La gelatina posee una punta de la licuefacción que, sin embargo, varíe considerablemente bajo diversas condiciones. Ordinariamente, los media que contienen gelatina del 12% a del 15% licuefarán o derretir en una temperatura en la vecindad de 24 a 26 C., solidifica el ing otra vez en 8 a 10 C. a una jalea clara, transparente. Por consiguiente, los media de la gelatina se pueden emplear solamente para los organismos que no requieren una temperatura más alta que 22 a 24 C. para el desarrollo. El sobrecalentar en el proceso de la preparación o de la esterilización causará bajar considerable de la punta de la licuefacción, quizás en última instancia tan bajo que el media será líquido en la temperatura ambiente (20 a 21 C.) Será visto fácilmente cómo el último media de la gelatina no se podría práctico utilizar para el tion del isola de organismos. Algunos datos asistirán a fijar esto en mente.

La característica de solidificación de la gelatina varía en la proporción inversa con la época de la calefacción durante el proceso de la esterilización; su punta de licuefacción se baja en un promedio de 2 C. para cada hora de la calefacción en 100 C. Esto hace claramente porqué tal cuidado se debe tomar en la preparación de un media de la gelatina, en la esterilización fraccionaria de este media en vapor que fluye, y porqué el refrescarse inmediato es aftei necesario; cada fraccionamiento en el proceso de su preparación.

GELATINA 35

Aunque las temperaturas sobre 100 C. son mucho más destructivas a la característica de solidificación que la de 100 C., es posible esterilizar un media que contiene el 12% a el 15% de gelatina en el autoclav (7 a 8 Ibs. Pressure) en 112 a 113 C. por veinte minutos o en 15 Ibs. Pressure (120 C. por cinco minutos) sin deteriorar su utilidad como medio de cultivo sólido.

Este uso del vapor bajo presión (vapor seco) es casi necesario en el caso de un media de la gelatina efectuar el zation del sterili, puesto que gelatina, de su fuente, del método de preparación, y de defectos más últimos a la contaminación, casi contener o lleva seguramente sobre su superficie una gran cantidad de esporas muy resistentes. La calefacción en 100 C. por treinta minutos en tres o aún cuatro o cinco días consecutivos no es siempre eficiente, como estas esporas no germinan siempre en el plazo de veinticuatro horas después de la calefacción y, refiriendo a los datos arriba, de ella se considera fácilmente que el bajar de la punta de la facción del lique no debe ser considerado como insignificante en el proceso de la esterilización intermitente.

La gelatina posee otra característica que haga valioso para el trabajo bacteriológico: es decir, en gelatina la placa no cultiva ninguna agua de la condensación recoge ordinariamente en la cubierta del plato de petri (como con agar) más adelante para caer en la superficie de la gelatina y para borrar así formas de colonias y para hacer a colonias aisladas contaminarse con las vecinas. El salvar de este media en tubos de prueba o en placas, estéril o inoculado, así se hace mucho más simple que con agar.

REFERENCIA

VAN DERHEIDE, C.C.: Der Nahrgelatine, arco de Verflussigungspunkt del und de Gelatinose Losungen. F. Hyg., Bd. 30, 1897, pp. 82-115.

36 GENERAL MICROBIOLOGÍA

EJERCICIO 8. PREPARACIÓN DE LA GELATINA NUTRIENTE

Aparato. infusión estéril de la carne de 500 c.c.; agua del golpecito de 500 c.c.; 150 gms. Gelatina; 10 gms. Peptone, Witte; 5 gms. Sal; 10 gms. Albumen del huevo (o un huevo); baño de agua; termómetro; cubo de 3.5 del litro mercancías de la ágata; barra de revolvimiento pesada larga; aparato de la titulación; NaOH N/20; NaOH De N/l; phenolphthalein (indicador); agua destilada; ances gruesos del bal; mechero de gas grande; embudo grande; papel de filtro trenzado; embudo que llena; tubos de prueba estériles; 500 c.c estériles. Frascos de erlenmeyer; aparato para la esterilización del vapor; baño o refrigerador del ejecutar-agua.

Método. 1. Ponga el contenido de un frasco de la infusión de la carne (500 c.c.) en un cubo de la ágata y agregue 500 c.c. del agua del golpecito.

2. Agregue la gelatina del 15%, el peptone del 1% Witte, y 0.5% sal a la mezcla.

3. Caliente esta mezcla en un baño de agua para disolver la gelatina, el peptone y la sal, revolviendo de vez en cuando.

4. Refresqúese a 40-50 C. Esto es imprescindible.

5. Entonces agregue 10 gms. Del albumen del huevo que se ha mezclado bien con 100 c.c. del agua del golpecito. (puesto el albumen del huevo en un vaso, agregue bastante agua para formar una goma y para revolver hasta que es liso; entonces agregue el agua restante. Un huevo batido bien se puede substituir.) Mezcle todos a conciencia.

6. Calor en el vapor que fluye por minutos forty-five o en el autoclav en 105 C. por treinta minutos.

7. Titule con NaOH N/20.

8. Ajuste la reacción del media a +15 con el NaOH normal o HC1 normal. Re titule y ajuste otra vez en caso de necesidad.

9. El contrapeso y observa el peso.

10. Hierva quince minutos sobre la llama libre, revolviendo con stantly.

11. Counterpoise y restablezca cualquier pérdida por la evaporación con agua destilada.

12. Fíltrese mientras que hierve el papel de filtro trenzado directo caliente

AGAR 37

apenas lavado previamente con el agua hirvienda del litro del 1/2. Pase el líquido filtrado a través del mismo papel hasta que está brillante y claro.

13. Llene treinta tubos de prueba estériles, usando aproximadamente 8 c.c. del media para cada tubo. Divida el resto en dos porciones iguales y coloqúelo en los frascos de erlenmeyer estériles del litro del 1/2.

14. Caliente en vapor que fluye veinte minutos en tres días sucesivos.

15. Refresque la gelatina en un baño del ejecutar-agua, inmediatamente después de cada calefacción. El cuidado se debe tomar para calentar la gelatina lo menos posible, puesto que la parte de la potencia de solidificación de la gelatina se pierde con cada aplicación del calor.

16. Para esterilizar un frasco grande de gelatina nutriente, calor por veinte minutos en cuatro días en la sucesión.

AGAR

El agar o el agar-agar (de un significado malay "vector de la palabra del vege"), la sustancia que se utiliza en la preparación de una clase de medio de cultivo sólido para el trabajo bacteriológico, es un favorable conducto preparado de las varias algas marinas encontradas cerca del Océano Índico y en aguas chinas y japonesas. Este tipo de alga marina tiene varios nombres comunes, como el musgo de Ceilán o del Jaffna, la ictiocola de Bengala, etc. Las varias especies se utilizan para el alimento y el comercio es considerable.

Payen, un -(about francés del químico 1859), obtuvo la jalea del agar de la alga marina, corneum de Gelidium, de la manera lowing del fol: La alga marina fue permitida estar parada por una cierta hora en una solución diluida fría del ácido hidroclórico; el ácido fue quitado aclarando varias veces con agua, después la alga marina fue colocada en una solución diluida fría del amoníaco; el amoníaco fue quitado después por aclarar relanzado con la agua fría. Durante este proceso, la alga marina perdió el 53% de su peso en sales mineral, materia que coloreaba, y componentes orgánicos. La porción restante fue hervida en agua,

38 GENERAL MICROBIOLOGÍA

durante qué proceso fue extraída la jalea vegetal. La solución así que obtenido fue vertida apagado, saliendo del sedimento inútil detrás. Esta jalea está igual en la composición que que existiendo en los tejidos finos vegetales; no se ha cambiado químicamente, al igual que colágeno en la preparación de la gelatina. El agar comercial es preparado lo más probablemente posible evaporando esta solución al estado seco por diversos medios.

El agar viene generalmente en las manos del bacteriologist como de largo, delgadas, grisa'ceo-blancas tiras, o como bloques, o más especialmente en años recientes, en la forma de un der gris-blanco del prisionero de guerra de la fabricación europea.

El agar, en contraste con gelatina, es un carbohidrato, es decir, consiste en una combinación del carbón, del hidrógeno y del oxígeno solamente. Los rastros del nitrógeno están presentes como impurezas. Las determinaciones cualitativas antedichas de sus uents elementales del constit fueron hechas por Payen, por Parumbaru y por Hueppe, que hizo sus determinaciones en agar de diversas fuentes. Por lo que puede ser comprobado, su fórmula empírico todavía no se ha investigado a ningún fragmento.

Como gelatina, sin embargo, el agar es un coloide reversible. Remoja para arriba en agua fría, disuelve en agua caliente después de hervir largo a una solución clara insípida e inodora, e ifies sólidos sobre refrescarse a más o a menos jalea opaca. Su solución acuosa es neutral o casi hilo neutro a la ftaleína del fenol; no obstante, una gota o dos del vigésimo hidrato normal del sodio es suficientes hacer el color rosado perceptible.

Las características coloidales del agar no son destruidas por una calefacción largo-continuada en una temperatura alta, ni por la acción de microorganismos ordinarios al igual que los de la gelatina. Las características antedichas, sin embargo, se influencian y se pueden deteriorar enteramente por la reacción del líquido en el cual se disuelve el agar.

La reacción del líquido, es decir, si es ácida o alcalina, influencia el agar en cuanto a su solubilidad, solidez, color, transparencia, filtrabilidad y cantidad de agua del tion del condensa. Si el agar se disuelve en un líquido de una acidez

AGAR 39

el equivalente a 0.1% HC1, el agar disuelve muy fácilmente, se filtra rápidamente, el líquido filtrado resultante que es una solución amarilla, transparente, deslizadiza, acuosa ligera que no solidifica sobre refrescarse. Si un porcentaje más pequeño del ácido clórico hidráulico se utiliza, la solidificación ocurre (debajo de 40 C.) pero la jalea "no estará parada para arriba" y es por lo tanto inútil para las culturas de la inclinación o de la placa de agar. Una cantidad grande de agua con del densation está presente también.

Si el agar se disuelve en un caldo alcalino o neutral débil, un líquido grueso, rojizo, viscoso es que se filtra lentamente y solidifica rápidamente en 40 C., a una jalea muy sólida, opaca, seca, el tener obtenido pero poca agua de la condensación; conserva su dimensión de una variable bien en inclinaciones y en placas. Así el valor del agar como medio de cultivo sólido se levanta o se baja según el cjegree de la alcalinidad o de la acidez.

Debe ser observado además, sin embargo, que cuando la característica de solidificación del agar es destruida una vez por la presencia de un exceso del ácido en su solución, esta característica se puede nunca recuperar por la neutralización con el álcali; el ácido por manently destruye la reversibilidad del coloide.

El punto de fusión del agar (de 1.5% en la solución neutral) es 97 C. y aunque su punta de solidificación está en 40 C., cuando una vez que haya solidificado él estará parado para arriba en el termóstato en una temperatura de 50 C. Para los propósitos bacteriológicos, solamente esa forma de agar puede ser utilizada que siga siendo flúido en a partir del 38 a 40 C. Agar que sigue siendo flúido solamente en una temperatura sobre esta punta sería demasiado caliente cuando en un estado flúido para el uso; la vitalidad de los organismos introducidos sería deteriorada o destruida por la temperatura alta.

Las dificultades se encuentran en la preparación de un medio de cultivo sólido del agar, debido a su solubilidad lenta, cosity del vis y filtrabilidad lenta consiguiente. Su solución (digestión) se efectúa, según lo mencionado sobre, por una calefacción larga en un baño de agua, un esterilizador del vapor, un autoclav, o un excedente una llama libre. La longitud del tiempo requerida para la digestión completa depende de tres cosas: La reacción del

40 GENERAL MICROBIOLOGÍA

líquido en el cual se disuelve el agar, el contenido de los por ciento del agar, y el método de disolver. La influencia de la reacción de las soluciones del agar se ha tratado arriba. Para el uso general de la cultura, sin embargo, el agar ordinario se hace una escala más llena +15 (el agar solidifica con dificultad sobre una escala más llena +30).

El agar de un por ciento es mucho más fácilmente soluble bajo condiciones iguales que un por ciento más alto. Un y un medio por ciento es la cantidad usada en media ordinarios del agar, dando una jalea algo más derecha y así más deseable.

El agar se digiere lo más rápidamente posible sobre una llama libre. Si no calentado suficientemente, después de la filtración y de la esterilización del agar por el método intermitente, un itate floculento del precip aparece con frecuencia en el media previamente claro. Esto se puede hacer para desaparecer en la mayoría de los casos sujetando a la temperatura del autoclav (120 C. 15 Ibs.).

El agar para los medios de cultivo debe estar enteramente claro cuando líquido, y homogéneo opaco-translu'cido cuando sólido; debe tener un translucence suficiente permitir a colonias profundas en las placas o las culturas de la puñalada que se observarán fácilmente; no debe contener el material, el sedimento, o pedazos floculentos de papel del algodón o de filtro, como éstos obstaculizan el desarrollo típico de la colonia de microorganismos y, al inexperto, se pueden algunas veces confundir desde colonias.

En los primeros métodos usados siempre para hacer los medios de cultivo del agar, en vez de filtrar el agar caliente a través del papel de filtro, del algodón absorbente, o del asbesto, fue permitido refrescarse, ing del dur que procesan el sedimento colocado al fondo; cuando el sólido el sedimento fue cortado. Este método no era deseable, pues la claridad del agar resultante dependería del índice de refrescarse; cuanto más lento es el refrescarse, sedimentación ocurriría más totalmente.

El agar no es un alimento para los microorganismos en general, es decir, no es afectado por las enzimas digestivas de la mayoría de las bacterias, al igual que gelatina. Sin embargo, se saben algunas bacterias que tienen la potencia del agar de licuefacción, entre la cual está B.

PREPARACIÓN DEL AGAR NUTRIENTE 41

los sp. del gelaticus n. (gran) y Bad. Nenckii, que se encuentran, como esperaría, en agua de mar. Esta inercia tive del compara del agar hace valioso para la preparación, de los media sintetizados sólidos, el valor de los cuales puede ser en hanced sujetando el agar comercial a la fermentación natural durante qué proceso es utilizado cualquier rastro de las sustancias capaces del alimento del provecho para arriba por los microorganismos presentes. (Beijerinck.)

El agar está de uso especial en el trabajo bacteriológico en el cual la cultivación de microorganismos se debe conducir en una temperatura sobre el punto de fusión de la gelatina. Esta característica ha hecho posible los grandes pasos grandes que se han tomado en bacteriología médica, tantas bacterias patógenas se puede aislar y crecer solamente con dificultad en los tures del tempera debajo de el del cuerpo.

REFERENCIAS

SMITH, ERWIN F.: Bacterias en lo referente a enfermedades de planta. Vol.. I,

pp. 31-36. Varias ilustraciones. SCHULTZ, N. K.: Einiger Nahrsubstrate de Zur Frage von der Bereitung.

Centavo. F. Bakt. I. Orig., Bd. 10, 1891, p. 57.

EJERCICIO 9. PREPARACIÓN DEL AGAR NUTRIENTE

Aparato. cubo de 3.5 a'gata-mercanci'as del litro; 15 gms. Agar; 10 gms. Peptone; 5 gms. Sal; 10 gms. Albumen del huevo (o un huevo); infusión estéril de la carne de 500 c.c.; agua del golpecito de 500 c.c.; aparato de la titulación; NaOH N/20; NaOH De N/l; ftaleína del fenol (indicador); agua destilada; embudo grande; papel de filtro trenzado; embudo que llena; tubos de prueba estériles; frasco estéril del litro; equilibrios gruesos; mechero de gas grande; taza que mide de 1 litro; aparato para la esterilización del vapor.

Método. 1. En gms de 3 litros de la ágata de las mercancías de un lugar 15 del cubo. Del agar en 500 c.c. del agua del golpecito.

2. Lave el agar bien, separando los fragmentos y el ing del squeez él a través de las manos.

3. Decante el agua sucia, midiendo la cantidad vertida

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MICROBIOLOGÍA GENERAL

de; substituya por la misma cantidad de agua limpia del golpecito.

Relance.

4. Disuelva sobre una llama y una ebullición libres por cinco minutos, revolviendo constantemente. El tion del solu debe estar enteramente libre de terrones del agar.

5. Agregue el peptone del 1% Witte y 0.5% sal al agar que hierve.

6. A 500 c.c. de la carne en la fusión agregue 10 gms. Del al del huevo bumen que se ha mezclado bien con 100 c.c. del agua del golpecito. (puesto el albumen del huevo en un vaso y agregue bastante agua para formar una goma. Revuelva hasta liso y después agregue el agua del ing del restante. Un huevo; receptor de papel batido,

Fig. 9. El embudo de la agua caliente para se puede substituir.) Mezcle todo el agar o gelatina de filtración. A conciencia

7. Vierta la mezcla derretida del agar lentamente en la infusión de la carne, revolviendo constantemente. Calor en el autoclav en 120 C. por minutos forty-five o por una hora en vapor que fluye.

Nota. La época para esta calefacción puede ser alargada a la ventaja, pero nunca ser acortada. Si el agar no se ha calentado suficientemente antes de la filtración, un precipitado floculento formará en los tubos sobre la calefacción en vapor que fluye. En la mayoría de los casos esto se puede hacer para desaparecer calentando por un tiempo corto en el autoclav en 15 Ibs.

8. Titule con NaOH N/20.

9. Ajuste la reacción del media a +15 con el NaOH normal o HC1 normal. Retitrate y reajusta la reacción en caso de necesidad.

10. El contrapeso y observa el peso.

11. Hierva quince minutos sobre una llama libre, revolviendo con stantly,

SOLUCIÓN 43 DEL PEPTONE DE DUNHAM

12. Counterpoise y haga para arriba cualquier pérdida en peso con hervir el agua destilada.

13. Filtre el papel de filtro trenzado directo caliente que hierve apenas lavado previamente con el agua hirvienda. Pase el líquido filtrado a través del mismo papel hasta que esta' claro.

14. Tubos de prueba estériles del terraplén 60 a 70, usando aproximadamente 8 c.c. del media para cada tubo.

15. Caliente en vapor que fluye veinte minutos en tres días cessive del suc.

16. En el extremo de la calefacción final, coloque los tubos del agar en una posición inclinada para solidificar (no permita que el media toque el enchufe) de modo que sea una superficie grande pre sented para la cultivación de microorganismos. Éstos se llaman las inclinaciones de agar.

Nota. Si se van los tubos del agar a ser utilizados solamente para las inclinaciones de agar, menos del media se necesita en el tubo que cuando él debe ser utilizada para el laminado.

17. Para esterilizar un frasco grande de agar, calor por treinta minutos en cuatro días sucesivos.