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Cultura Bacteriana De las Placas De Agar

Información sobre el crecimiento de culturas bacterianas usando las placas de la cultura del agar

Índice:

Placa de agar y media del agar que localizan averías y asuntos del foro

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¿Cuál es agar - definición?

El agar o el agar-agar (de un significado malay "vehículo" de la palabra), la sustancia que se utiliza en la preparación de una clase de medio de cultivo sólido para el trabajo bacteriológico, es un favorable conducto preparado de las varias algas marinas encontradas cerca del Océano Índico y en aguas chinas y japonesas. Este tipo de alga marina tiene varios nombres comunes, como el musgo de Ceilán o de Jaffna, la ictiocola de Bengala, etc. Las varias especies se utilizan para el alimento y el comercio es considerable.

Fondo e historia en la microbiología usando el caldo y las placas nutrientes del agar

Payen, un -(about francés del químico 1859), obtuvo la jalea del agar de la alga marina, corneum de Gelidium, de la manera siguiente: La alga marina fue permitida estar parada por una cierta hora en una solución diluida fría del ácido hidroclórico; el ácido fue quitado aclarando varias veces con agua, después la alga marina fue colocada en una solución diluida fría del amoníaco; el amoníaco fue quitado después por aclarar relanzado con la agua fría. Durante este proceso, la alga marina perdió el 53% de su peso en sales mineral, materia que coloreaba, y componentes orgánicos. La porción restante fue hervida en el agua, durante que proceso la jalea vegetal fue extraída. La solución así que obtenido fue vertida apagado, saliendo del sedimento inútil detrás. Esta jalea está igual en la composición que que existiendo en los tejidos finos vegetales; no se ha cambiado químicamente, al igual que colágeno en la preparación de la gelatina. El agar comercial es preparado lo más probablemente posible evaporando esta solución al estado seco por diversos medios.

El agar viene generalmente en las manos del bacteriologist como de largo, delgadas, grisa'ceo-blancas tiras, o como bloques, o más especialmente en años recientes, en la forma de un der gris-blanco del prisionero de guerra de la fabricación europea.

El agar, en contraste con gelatina, es un carbohidrato, es decir, consiste en una combinación del carbón, del hidrógeno y del oxígeno solamente. Los rastros del nitrógeno están presentes como impurezas. Las determinaciones cualitativas antedichas de sus uents elementales del constit fueron hechas por Payen, por Parumbaru y por Hueppe, que hizo sus determinaciones en agar de diversas fuentes. Por lo que puede ser comprobado, su fórmula empírico todavía no se ha investigado a ningún fragmento.

Como gelatina, sin embargo, el agar es un coloide reversible. Remoja para arriba en agua fría, disuelve en agua caliente después de hervir largo a una solución clara insípida e inodora, e ifies sólidos sobre refrescarse a más o a menos jalea opaca. Su solución acuosa es neutral o casi hilo neutro a la ftaleína del fenol; no obstante, una gota o dos del vigésimo hidrato normal del sodio es suficientes hacer el color rosado perceptible.

Las características coloidales del agar no son destruidas por una calefacción largo-continuada en una temperatura alta, ni por la acción de microorganismos ordinarios al igual que los de la gelatina. Las características antedichas, sin embargo, se influencian y se pueden deteriorar enteramente por la reacción del líquido en el cual se disuelve el agar.

La reacción del líquido, es decir, si es ácida o alcalina, influencia el agar en cuanto a su solubilidad, solidez, color, transparencia, filtrabilidad y cantidad de agua del tion del condensa. Si el agar se disuelve en un líquido de una acidez equivalente a 0.1% HC1, el agar disuelve muy fácilmente, se filtra rápidamente, el líquido filtrado resultante que es una solución amarilla, transparente, deslizadiza, acuosa ligera que no solidifica sobre refrescarse. Si un porcentaje más pequeño del ácido clórico hidráulico se utiliza, la solidificación ocurre (debajo de 40 C.) pero la jalea "no estará parada para arriba" y es por lo tanto inútil para las culturas de la inclinación o de la placa de agar. Una cantidad grande de agua con del densation está presente también.

Si el agar se disuelve en un caldo alcalino o neutral débil, un líquido grueso, rojizo, viscoso es que se filtra lentamente y solidifica rápidamente en 40 C., a una jalea muy sólida, opaca, seca, el tener obtenido pero poca agua de la condensación; conserva su dimensión de una variable bien en inclinaciones y en placas. Así el valor del agar como medio de cultivo sólido se levanta o se baja según el cjegree de la alcalinidad o de la acidez.

Debe ser observado además, sin embargo, que cuando la característica de solidificación del agar es destruida una vez por la presencia de un exceso del ácido en su solución, esta característica se puede nunca recuperar por la neutralización con el álcali; el ácido por manently destruye la reversibilidad del coloide.

El punto de fusión del agar (de 1.5% en la solución neutral) es 97 C. y aunque su punta de solidificación está en 40 C., cuando una vez que haya solidificado él estará parado para arriba en el termóstato en una temperatura de 50 C. Para los propósitos bacteriológicos, solamente esa forma de agar puede ser utilizada que siga siendo flúido en a partir del 38 a 40 C. Agar que sigue siendo flúido solamente en una temperatura sobre esta punta sería demasiado caliente cuando en un estado flúido para el uso; la vitalidad de los organismos introducidos sería deteriorada o destruida por la temperatura alta.

Ventajas y desventajas como agar como media nutrientes

Las dificultades se encuentran en la preparación de un medio de cultivo sólido del agar, debido a su solubilidad lenta, viscosidad y filtrabilidad lenta consiguiente. Su solución (digestión) se efectúa, según lo mencionado sobre, por una calefacción larga en un baño de agua, un esterilizador del vapor, un autoclav, o un excedente una llama libre. La longitud del tiempo requerida para la digestión completa depende de tres cosas: La reacción del líquido en el cual se disuelve el agar, el contenido de los por ciento del agar, y el método de disolver. La influencia de la reacción de las soluciones del agar se ha tratado arriba. Para el uso general de la cultura, sin embargo, el agar ordinario se hace una escala más llena +15 (el agar solidifica con dificultad sobre una escala más llena +30).

El agar de un por ciento es mucho más fácilmente soluble bajo condiciones iguales que un por ciento más alto. Un y un medio por ciento es la cantidad usada en media ordinarios del agar, dando una jalea algo más derecha y así más deseable.

El agar se digiere lo más rápidamente posible sobre una llama libre. Si no calentado suficientemente, después de la filtración y de la esterilización del agar por el método intermitente, un itate floculento del precip aparece con frecuencia en el media previamente claro. Esto se puede hacer para desaparecer en la mayoría de los casos sujetando a la temperatura del autoclav (120 C. 15 Ibs.).

El agar para los medios de cultivo debe estar enteramente claro cuando líquido, y homogéneo opaco-translu'cido cuando sólido; debe tener un translucence suficiente permitir a colonias profundas en las placas o las culturas de la puñalada que se observarán fácilmente; no debe contener el material, el sedimento, o pedazos floculentos de papel del algodón o de filtro, como éstos obstaculizan el desarrollo típico de la colonia de microorganismos y, al inexperto, se pueden algunas veces confundir desde colonias.

En los primeros métodos usados siempre para hacer medios de cultivo del agar, en vez de filtrar el agar caliente a través del papel de filtro, del algodón absorbente, o del asbesto, fue permitido refrescarse, durante que proceso el sedimento colocado al fondo; cuando el sólido el sedimento fue cortado. Este método no era deseable, pues la claridad del agar resultante dependería del índice de refrescarse; cuanto más lento es el refrescarse, sedimentación ocurriría más totalmente.

 

El agar no es un alimento para los microorganismos en general, es decir, no es afectado por las enzimas digestivas de la mayoría de las bacterias, al igual que gelatina. Sin embargo, se saben algunas bacterias que tienen la potencia del agar de licuefacción, entre la cual están los sp. del gelaticus n. del B. (gran) y Bad. Nenckii, que se encuentran, como esperarían, en agua de mar. Esta inercia tive del compara del agar hace valioso para la preparación, de los media sintetizados sólidos, el valor de los cuales puede ser en hanced sujetando el agar comercial a la fermentación natural durante qué proceso es utilizado cualquier rastro de las sustancias capaces del alimento del provecho para arriba por los microorganismos presentes. (Beijerinck.)

El agar está de uso especial en el trabajo bacteriológico en el cual la cultivación de microorganismos se debe conducir en una temperatura sobre el punto de fusión de la gelatina. Esta característica ha hecho posible los grandes pasos grandes que se han tomado en bacteriología médica, tantas bacterias patógenas se puede aislar y crecer solamente con dificultad en los tures del tempera debajo de el del cuerpo.

 

 

EJERCICIO 9. PREPARACIÓN DEL AGAR NUTRIENTE

Aparato. cubo de 3.5 a'gata-mercanci'as del litro; 15 gms. Agar; 10 gms. Peptone; 5 gms. Sal; 10 gms. Albumen del huevo (o un huevo); infusión estéril de la carne de 500 c.c.; agua del golpecito de 500 c.c.; aparato de la titulación; NaOH N/20; NaOH De N/l; ftaleína del fenol (indicador); agua destilada; embudo grande; papel de filtro trenzado; embudo que llena; tubos de prueba estériles; frasco estéril del litro; equilibrios gruesos; mechero de gas grande; taza que mide de 1 litro; aparato para la esterilización del vapor.

Método. 1. En gms de 3 litros de la ágata de las mercancías de un lugar 15 del cubo. Del agar en 500 c.c. del agua del golpecito.

2. Lave el agar bien, separando los fragmentos y el ing del squeez él a través de las manos.

3. Decante el agua sucia, midiendo la cantidad vertida

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MICROBIOLOGÍA GENERAL

de; substituya por la misma cantidad de agua limpia del golpecito.

Relance.

4. Disuelva sobre una llama y una ebullición libres por cinco minutos, revolviendo constantemente. El tion del solu debe estar enteramente libre de terrones del agar.

5. Agregue el peptone del 1% Witte y 0.5% sal al agar que hierve.

6. A 500 c.c. de la carne en la fusión agregue 10 gms. Del al del huevo bumen que se ha mezclado bien con 100 c.c. del agua del golpecito. (puesto el albumen del huevo en un vaso y agregue bastante agua para formar una goma. Revuelva hasta liso y después agregue el agua del ing del restante. Un huevo; receptor de papel batido,

Fig. 9. El embudo de la agua caliente para se puede substituir.) Mezcle todo el agar o gelatina de filtración. A conciencia

7. Vierta la mezcla derretida del agar lentamente en la infusión de la carne, revolviendo constantemente. Calor en el autoclav en 120 C. por minutos forty-five o por una hora en vapor que fluye.

Nota. La época para esta calefacción puede ser alargada a la ventaja, pero nunca ser acortada. Si el agar no se ha calentado suficientemente antes de la filtración, un precipitado floculento formará en los tubos sobre la calefacción en vapor que fluye. En la mayoría de los casos esto se puede hacer para desaparecer calentando por un tiempo corto en el autoclav en 15 Ibs.

8. Titule con NaOH N/20.

9. Ajuste la reacción del media a +15 con el NaOH normal o HC1 normal. Retitrate y reajusta la reacción en caso de necesidad.

10. El contrapeso y observa el peso.

11. Hierva quince minutos sobre una llama libre, revolviendo con stantly,

SOLUCIÓN 43 DEL PEPTONE DE DUNHAM

12. Counterpoise y haga para arriba cualquier pérdida en peso con hervir el agua destilada.

13. Filtre el papel de filtro trenzado directo caliente que hierve apenas lavado previamente con el agua hirvienda. Pase el líquido filtrado a través del mismo papel hasta que esta' claro.

14. Tubos de prueba estériles del terraplén 60 a 70, usando aproximadamente 8 c.c. del media para cada tubo.

15. Caliente en vapor que fluye veinte minutos en tres días cessive del suc.

16. En el extremo de la calefacción final, coloque los tubos del agar en una posición inclinada para solidificar (no permita que el media toque el enchufe) de modo que sea una superficie grande pre sented para la cultivación de microorganismos. Éstos se llaman las inclinaciones de agar.

Nota. Si se van los tubos del agar a ser utilizados solamente para las inclinaciones de agar, menos del media se necesita en el tubo que cuando él debe ser utilizada para el laminado.

17. Para esterilizar un frasco grande de agar, calor por treinta minutos en cuatro días sucesivos.

 

 

 

Referencias para la cultura bacteriana del agar

SMITH, ERWIN F.: Bacterias en lo referente a enfermedades de planta. Vol.. I,

pp. 31-36. Varias ilustraciones. SCHULTZ, N. K.: Einiger Nahrsubstrate de Zur Frage von der Bereitung.

Centavo. F. Bakt. I. Orig., Bd. 10, 1891, p. 57.