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La inmunofluorescencia es el etiquetado de anticuerpos o de antígenos con los tintes fluorescentes. Esta técnica es de uso frecuente visualizar la distribución subcelular de biomoléculas del interés. las secciones o las culturas Inmunofluorescente-etiquetadas del tejido son estudiadas usando un microscopio de fluorescencia o por microscopia confocal.
Lo más comúnmente posible, la inmunofluorescencia emplea dos conjuntos de anticuerpos: un anticuerpo primario se utiliza contra el antígeno del interés; se introduce un anticuerpo subsecuente, secundario, teñir-juntado que reconoce el anticuerpo primario. De este modo el investigador puede crear varios anticuerpos primarios que reconozcan los varios antígenos, pero, porque todos comparten una región constante común, puede ser reconocido por un solo anticuerpo teñir-juntado. Esto es hecha típicamente usando los anticuerpos hechos en diversa especie. Por ejemplo, un investigador pudo crear los anticuerpos en una cabra que reconocen varios antígenos, y después emplea los anticuerpos teñir-juntados del conejo que reconocen la región constante del anticuerpo de la cabra (anti-cabra denotada del conejo). Esto permite la reutilización de los anticuerpos teñir-juntados difícil-a-fabricación en experimentos múltiples.
En algunos casos, es ventajoso utilizar los anticuerpos primarios etiquetados directamente con un fluoróforo. Este etiquetado directo disminuye el número de pasos de progresión en el procedimiento de coloración y, más importantemente, evita a menudo problemas de la reactividad cruzada y de alto fondo. El etiquetado fluorescente se puede realizar en menos de una hora con los kits de etiquetas fácilmente disponibles.
Muchas aplicaciones de la inmunofluorescencia han sido anticuadas por el desarrollo de las proteínas recombinantes que contenían los dominios fluorescentes de la proteína, e.g. proteína fluorescente del verde (GFP). El uso de tales las proteínas “marcadas con etiqueta” permite una localización mucho mejor y menos interrupción de la función de la proteína.
Las aplicaciones de la inmunofluorescencia incluyen:
Como con la mayoría de las técnicas de la fluorescencia, un problema significativo con inmunofluorescencia photobleaching. La pérdida de actividad causada photobleaching puede ser controlada reduciendo la intensidad o la duración de la exposición luminosa, aumentando la concentración de fluorophores, o empleando fluorophores más robustos que sean menos blanqueo propenso (e.g. Alexa Fluors o DyLight Fluors).
Porque contienen los ingredientes que actúan sobre uno a, muchas mezclas son las más eficientes cuando fresco compuesta.
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Vídeo de la inmunofluorescencia
Inmunofluorescencia. Este vídeo explica cómo utilizar inmunofluorescencia para manchar diversas partes de la célula por junio Cheng.
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Etiquetas: células de la mancha de la inmunofluorescencia
Fecha: 2008-05-04
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