Inhibición de PCR de DNA

Dionisia · #1 (**permalink**) 06-23-2008, 12:14

¡HOLA TODOS!

Tengo un problema grande del pcr. Estoy intentando conducir un pcr usando la DNA del plasmid que purifiqué con un kit de Qiagen Midi.

Estoy utilizando esta DNA para hacer una curva estándar para qRT-PCR.

Mi curva estándar para el qRT-PCR consiste en una dilusión serial de la cinco-punta que se extienda de 10ng a 0.01ng de la DNA en un volumen de la reacción 25uL.

Mi problema es que no veo ninguna amplificación con las dos puntas más altas en la curva que es los puntos 10ng y 1ng.

No pienso que mis reactivo se están limitando porque optimicé la reacción de PCR en concentraciones más altas que las que esta' en mi curva. Algo está inhibiendo mi amplificación de PCR en concentraciones más altas de la DNA e incluso un representante de Qiagen sugirió que mi DNA pueda inhibir PCR.
¿Cualquier persona tiene ideas?
las gracias por everyones ayudan por adelantado
aclamaciones

postdock · #2 (**permalink**) 06-23-2008, 12:24

Hey allí,

¿qué almacenador intermediario del elution usted utilizó, el almacenador intermediario de Qiagen EB?

Hay sales y EDTA en Qiagen EB que pueda causar el apuro de PCR.

También no se olvide de que podría haber etanol residual de su miniprep que puede inhibir la eficacia de la reacción de PCR.

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